Influência de microRNAs na contração e transdiferenciação de células gliais de Müller da retina

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Siqueira, Paula Veloso
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Célula de Müller; Epiretinal membrane; Membrana epirretiniana; microRNA; Müller cell; TGF-β
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42134/tde-24082023-152907/

A membrana epirretiniana (ERM) é caracterizada pela formação de um tecido fibrocontrátil na superfície interna da retina causada por diversos fatores, tais como o TGF-β. As células gliais de Müller da retina desempenham um papel importante na patologia da ERM, transdiferenciando-se em miofibroblastos à medida que a doença progride. Esse fenótipo contrátil pode comprometer a estrutura retiniana, levando a uma diminuição da acuidade visual e até perda de visão central. MicroRNAs são pequenos filamentos de RNA que atuam regulando a expressão gênica e interferindo em processos fisiológicos e patológicos. Vários microRNAs já foram correlacionados com doenças fibróticas da retina. O objetivo deste trabalho foi investigar microRNAs expressos na retina e associados à doenças fibróticas,assim como explorar o papel do microRNA mais relevante na transdiferenciação e contração induzidas por TGF-β em células de Müller da linhagem humana MIO-M1. Células MIO-M1 foram tratadas com TGF-β e a expressão de miR-9, miR-16, miR-21 e miR-204 foi analisada por qPCR. Ensaios de ganho e perda de função foram realizados com miR-9. O RNA total foi isolado e a expressão de α-SMA (ACTA2) e glutamina sintetase (GLUL) foi analisada por qPCR. Para determinar a influência do miR-9 nos processos contráteis, foram realizados ensaios funcionais em gel de colágeno. Após 48 horas, miR-9 e miR-204, especialmente o miR-9, foram regulados negativamente na presença de TGF-β1 ou TGF-β2. A superexpressão de miR-9 diminuiu a transdiferenciação de miofibroblastos induzida por TGF-β das células de Müller, conforme observado pela redução de ACTA2 em 24 e 48 horas. A inibição de miR-9 em células tratadas com TGF-β1 manteve a expressão elevada de ACTA2 em comparação com o grupo com TGF-β1, especialmente em 48 horas. Não foram observadas diferenças significativas na viabilidade celular. A superexpressão de miR-9 reduziu e a inibição promoveu a formação de fibras de estresse em células tratadas com TGF-β1 ou TGF-β2, principalmente em 48 horas. Além disso, o mimetizador do miR-9 atenuou e o antagomiR não alterou os efeitos da contração induzida por ambas isoformas de TGF-β. O enriquecimento de alvos relevou genes preservados da via de sinalização TGF-β/Rho/ROCK (TGFB1, TGFBR2, ROCK1, ROCK2), bem como os genes MHY9 e MYLK, que participam ativamente na formação de fibras de estresse e contração de miofibroblastos, como alvos preditos de miR-9 e candidatos para futuros ensaios de validação. Dessa forma, miR-9 pode constituir um fator molecular promissor para o tratamento de membranas fibrocontráteis ao atuar principalmente na via de sinalização do TGF-β, reduzindo os efeitos celulares associados à doença.