Caracterização de vias oncogênicas em câncer de pâncreas: microRNAs e IKKβ

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Hasenkamp, Lutero Augusto
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Câncer de pâncreas; CITs; IKKβ IKKβ KRAS; microRNAs; Pancreatic cancer; PTEN; TICs
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11122023-165457/

O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) é o tumor sólido mais letal em humanos, sendo que menos de 10% dos pacientes sobrevivem 5 anos ou mais. Essa baixa sobrevida é atribuída ao fenótipo altamente metastático, à recidiva e à ineficácia das terapias disponíveis. Assim, a presente tese buscou caracterizar vias oncogênicas que contribuem para a malignidade de PDAC, visando assim aumentar o conhecimento necessário para desenvolvimento de novas terapias, sendo esta tese dividida em dois capítulos. No Capítulo 1, avaliamos a via de microRNAs (miRNAs) regulados pela KRAS oncogênica, que está presente em mais de 90% dos tumores de PDAC e ainda permanece sem tratamento disponível para este tipo de tumor. Dado que miRNAs efetores de KRAS ainda são pouco explorados, nosso objetivo foi identificar miRNAs induzidos pela KRAS oncogênica, que contribuem para o fenótipo maligno do PDAC<. Usando um ensaio de microarranjo de DNA, identificamos 17 miRNAs regulados positivamente por KRAS. A análise global de alvos destacou o supressor tumoral PTEN como o alvo regulado pelo maior número destes miRNAs (7 dos 17). Por meio da superexpressão e redução de expressão de KRAS, confirmamos que KRAS regula negativamente PTEN e regula positivamente 4 destes 7 miRNAs que têm PTEN como alvo. Para avaliar se a regulação de PTEN por KRAS poderia ser mediada por estes miRNAs, usamos ensaios de luciferase contendo trechos do 3\'UTR de PTEN. Tanto a KRAS, quanto o mir-19b-3p são capazes de regular a atividade de luciferase em PDAC. Como conclusão deste capítulo, nós identificamos uma assinatura de miRNAs induzidos por KRAS em PDAC que tem PTEN como alvo e validamos o miR-19b-3p como um dos miRNAs efetores na regulação dos níveis de PTEN por KRAS, contribuindo para o fenótipo maligno de PDAC. No Capítulo 2, investigamos o papel da quinase IKK para o fenótipo tronco-tumoral das células iniciadoras de tumor (CITs) pancreáticas, que constituem uma subpopulação de células tumorais consideradas responsáveis pela metástase e recidiva tumoral. A IKK desempenha um papel chave na ativação da via do NF-&#954;B, constitutivamente ativa em cerca de 70% dos casos de PDAC e que promove o fenótipo tronco-tumoral em diversos tipos de tumores. Assim, nosso objetivo foi determinar como a IKK&#946; afeta o fenótipo tronco-tumoral e metastático de células pancreáticas visando o desenvolvimento desta quinase como alvo terapêutico. Para avaliar CITs em linhagens de PDAC, utilizamos a cultura de tumoresferas e estabelecemos a linhagem AsPC-1-SORE6 expressando o gene repórter GFP sob o controle dos fatores de pluripotência SOX2 e OCT4. Embora a inibição da expressão de IKK&#946; por interferência de RNA tenha reduzido a formação de tumoresferas, a inibição farmacológica de IKK&#946; foi ineficaz em inibir o fenótipo tronco-tumoral das CITs pancreáticas, não alterando a formação de tumoresferas ou alterando transitoriamente a frequência da população SORE6- GFP+. Por outro lado, a inibição de IKK&#946; reduziu a migração e invasão celulares. Em conclusão, a IKK&#946; afeta o fenótipo tronco-tumoral de maneira quinase-independente e interfere na migração e invasão celulares, características importantes para metástase, podendo representar um potencial alvo terapêutico anti-metastático em PDAC.