Desenvolvimento de nanoemulsões catiônicas peguiladas visando à terapia gênica para a mucopolissacaridose tipo I

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Fraga, Michelle
• Orientador(a): Teixeira, Helder Ferreira
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Nanoemulsões; Terapia gênica; Mucopolissacaridose I; Polietileno glicol : PEG; Nanotecnologia; Doenças hereditárias
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/233470

A mucopolissacaridose tipo I (MPS I) é uma doença herdada de forma autossômica recessiva causada pela deficiência da enzima ά-L-iduronidase (IDUA), levando ao acúmulo intracelular de heparan e de dermatan sulfato em diversos tecidos. Este estudo teve por objetivo avaliar as potencialidades de nanoemulsões catiônicas peguiladas como um sistema de transferência gênica para o plasmídeo pIDUA em um modelo murino de MPS I. Formulações constituídas de um núcleo oleoso de triglicerídeos de cadeia média estabilizado pelo lipídeo catiônico DOTAP e pelos fosfolipídeos DOPE e DPSPE-PEG foram preparadas pelo procedimento de homogeneização à alta pressão. O pIDUA foi associado as nanoemulsões por adsorção ou encapsulamento de complexos pré-formados pIDUA-DOTAP na fase interna das nanoemulsões. A complexação do pIDUA com as nanoestruturas e a sua proteção frente à degradação pela enzima DNAse I foi demonstrada através de estudos de retenção em gel de agarose para ambos os modos de complexação. A presença do fosfolipídeo DSPE-PEG nas formulações teve um papel crucial na manutenção do diâmetro dos nanocomplexos na presença de proteínas do soro. Uma maior estabilidade do complexo obtido por encapsulamento foi detectada, uma vez que não foi verificada a liberação do pIDUA a partir destes complexos mesmo após 48 horas de incubação em soro. Uma organização lamelar foi identificada para as nanoemulsões por difração de raios X de energia dispersiva. A associação do pIDUA as formulações por adsorção ou encapsulamento conduz a estruturas menos organizadas. Complexos obtidos na relação de cargas +4/- foram administrados intravenosamente em camundongos nocaute MPS I. Foi demonstrado um aumento da atividade de IDUA (ensaio de fluorescência) e da expressão (RT-qPCR) em diferentes órgãos, em especial no fígado e nos pulmões, em comparação aos camundongos não tratados. A dose e o tempo parecem influenciar a transfecção nos diferentes órgãos avaliados. Não foram detectadas evidências de efeito deletério nos cortes histológicos dos tecidos dos principais órgãos após administração intravenosa dos complexos. O conjunto de resultados demonstra o potencial das nanoemulsões catiônicas contendo DSPE-PEG como um sistema de transferência gênica para MPS I.