Monitorização dos níveis de fenilalanina em pacientes com fenilcetonúria por meio de sangue impregnado em papel filtro : comparação de dois métodos

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Sebastião, Fernanda Medeiros
• Orientador(a): Schwartz, Ida Vanessa Doederlein
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Fenilcetonúrias; Técnicas de laboratório clínico; Fenilcetonúria materna; Cromatografia líquida de alta pressão; Cromatografia em papel; Fluorometria
• Palavras-chave em Inglês: Phenylketonuria; Follow Up; Diagnosis; Dried Blood Spots; Hyperphenylalaninemia
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/188960

Introdução: Os Erros Inatos do Metabolismo (EIM) são doenças genéticas causadas pela atividade deficiente de uma ou mais enzimas específicas ou por defeitos no transporte de proteínas. A fenilcetonúria (PKU) é um EIM causado pela atividade deficiente da fenilalanina-hidroxilase (PAH) que é responsável pela conversão de Fenilalanina (Phe) em Tirosina (Tyr). Esta doença pode ser detectada precocemente através da Triagem Neonatal e seu diagnóstico confirmado através da dosagem de aminoácidos por Cromatografia Líquida de Alta Performance (HPLC). O excesso de Phe e o consequente desbalanço de aminoácidos causam efeito tóxico no Sistema Nervoso Central (SNC) e por consequência perda de funções cognitiva e déficit cognitivo. O tratamento atual é feito principalmente através de dieta restrita em Phe, suplementação de aminoácidos essenciais e acompanhamento laboratorial e clínico. É importante lembrar que o diagnóstico e o tratamento precoce podem levar a excelentes resultados na qualidade de vida destes pacientes. Objetivo: O objetivo do presente trabalho foi avaliar dois métodos distintos: um método fluorimétrico desenvolvido In House (método A) e o Kit comercial de Fenilalanina Neonatal (Neonatal Phenylalanine Kit – Perkin Elmer®) (método B) para detecção dos níveis de Phe em amostras de sangue impregnado em papel filtro (SIPF) em pacientes com PKU que estão em acompanhamento no ambulatório do Serviço de Genética Médica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre (SGM-HCPA) e comparar estes resultados com os resultados obtidos por HPLC, o qual é considerado o padrão ouro para o diagnóstico e monitoramento de pacientes com PKU. Metodologia: Estudo transversal, prospectivo e observacional no qual foi realizada a determinação dos níveis de Phe em amostras de SIPF de pacientes com PKU acompanhados no ambulatório do SGM-HCPA.Os resultados obtidos foram comparados com os níveis de Phe apresentados, na mesma amostra, pelo método de HPLC (padrão ouro). As amostras foram obtidas a partir de sangue total heparinizado. Após a impregnação do sangue total no papel filtro a amostra foi centrifugada e houve a separação do plasma para a análise pelo método de HPLC. O papel filtro ficou secando a temperatura ambiente por no mínimo 4 horas e no máximo 24 horas. Após secagem total a amostra foi armazenada em saco plástico com sílica em freezer -80ºC até o dia da análise. Resultados: Foram analisadas 89 amostras de SIPF de 47 pacientes que são acompanhados no SGM-HCPA. Dos 47 pacientes testados, 20 (42,5%) possuem a forma clássica de PKU, 16 (34,1%) a forma leve da doença e em 11 o fenótipo não está definido. A correlação entre o método In House (método A) e o HPLC, e entre o Kit comercial de Fenilalanina Neonatal (método B) e o HPLC feita através da correlação de Spearman, o coeficiente angular, interceptação em y e correlação linear foram de 0,990, 1,0365, 3,8125, 09873 e 0,974, 1,0795, 31,98 e 0,895 respectivamente. O nível de significância das duas análises foi de p<0,05. Todas as amostras analisadas por HPLC que eram alteradas ou normais, também se mostraram da mesma forma com ambos os métodos testados. A análise feita através da razão do diagrama de Bland Altman mostrou que quanto menor o valor do HPLC, maior é a dispersão dos valores nos métodos A e B. Conclusões: Nossos testes sugerem que amostras de SIPF nos métodos A e B são boas alternativas para a monitorização dos níveis de Phe em pacientes com PKU, sendo que o método A apresentou maior concordância em relação ao padrão ouro.