Caracterização funcional do sistema complemento e análise da microbiota de Anopheles darlingi em resposta à infecção com plasmodium vivax

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Voges, Kamila
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Anopheles darlingi; Plasmodium vivax; Sistema complemento
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/181818

A malária é uma doença ocasionada por protozoários do gênero Plasmodium e transmitida ao homem por meio da picada de mosquitos do gênero Anopheles. No Brasil a maior parte dos casos da doença concentra-se na região Amazônica, onde grande parte das infecções é causada por Plasmodium vivax, e o A. darlingi é o principal vetor. Estudos recentes indicam que a microbiota e que o sistema imune dos mosquitos do gênero Anopheles, em particular, componentes do sistema complemento, possuem uma importante função na determinação da competência vetorial, podendo modular o desenvolvimento do parasita no mosquito. Apesar da importância epidemiológica de A. darlingi, pouco se sabe a cerca da composição de sua microbiota intestinal, e sobre as interações moleculares deste vetor com P. vivax. Neste cenário, temos como principais objetivos: 1) Avaliar o papel de LRIM1 (Leucine-rich repeat protein 1), um dos genes do complemento, na interface A. darlingi-P.vivax, e 2) Averiguar determinados aspectos da interação entre microbiota- A.darlingi- P.vivax. Quanto às análises de LRIM1, as topologias das árvores filogenéticas mostram maior relação filogenética entre A. darlingi e A. albimanus, apresentando-os como táxons irmãos. Para a realização dos ensaios funcionais, sintetizamos RNA dupla-fita com base na sequência codificadora de LRIM1 de A. darlingi e microinjetamos no tórax de fêmeas desta espécie, as quais foram posteriormente submetidas a uma infecção por P. vivax. Quanto aos ensaios funcionais, nossos resultados apresentaram níveis de oocistos e prevalência similares entre o grupo teste e controle, não havendo diferenças estatisticamente significativas em todas as réplicas analisadas. Deste modo, com os dados obtidos até o momento, é necessário considerar a hipótese de que LRIM1 não desempenhe um papel na defesa anti P.vivax em A. darlingi. Neste trabalho, nós também analisamos a composição da microbiota intestinal de mosquitos A. darlingi infectados com P.vivax, por meio de sequenciamento em larga escala da região hipervariavel V4 do gene 16S rRNA. As classes bacterianas mais abundantes observadas em nossas amostras foram: Gammaproteobacteria, Alphaproteobacteria, e Flavobacteria. Quanto ao nível taxonômico de família, Enterobacteriaceae foi observada em maior abundância nos mosquitos apresentando baixa infecção com P. vivax, sugerindo que esta família possa antagonizar o parasita. Ao passo que, Flavobacteriaceae foi obtida em maior proporção nos mosquitos que apresentaram alta infeção com P. vivax. Isso sugere que esta família, de alguma maneira, possa favorecer o parasita, e aumentar sua carga nos mosquitos. Diante disso, uma vez que na literatura trabalhos sobre a resposta imune de anophelinos brasileiros (especialmente A. darlingi) são escassos, dados sobre LRIM1, tais quais análises funcionais e filogenia, proveem informações que podem impulsionar outros estudos a respeito desta proteína, bem como de outros genes do sistema imune. Ademais, nossos resultados corroboram estudos anteriores em anophelinos, indicando que as bactérias associadas ao intestino de A.darligi podem desempenhar papel importante na infecção e resposta imune ao parasito.