Papel das armadilhas extracelulares dos neutrófilos (NETs) no curso da infecção in vitro pelo vírus sincicial respiratório (RSV)

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Diniz, Larissa Figueiredo Alves [UNESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Redes extracelulares dos neutrófilos; Vírus sincicial respiratório; antivirais; Docking molecular; neutrophil extracellular traps; respiratory syncytial virus; antivirals; molecular docking
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/152543

Neutrófilos são recrutados para o tecido pulmonar de pacientes acometidos por diversas doenças respiratórias. No sítio de infecção, neutrófilos secretam NETs (Neutrophil Extracellular Traps) ,fibras de DNA decoradas com proteínas nucleares, granulares e citoplasmáticas. As NETs contribuem para a captura e inativação de diversos microorganismos. Um corpo crescente de evidências tem apresentado que o acúmulo das NETs resulta em efeitos citotóxicos diretos sobre células endoteliais e epiteliais. O hRSV (human Respiratory Syncytial Virus), é a causa mais comum de doença grave do trato respiratório inferior em crianças pequenas em todo o mundo, gerando um alto número de hospitalizações e um alto custo para o sistema de saúde. Neutrófilos estimulados pela proteína F do hRSV geram NETs capazes de capturar partículas virais e assim reduzir a disseminação viral. A massiva produção de NETs causa obstrução das vias aéreas e contribui para o agravamento da doença. O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos benéficos e/ou deletérios das NETs no curso da infecção pelo hRSV. Para tanto, células Hep-2 foram infectadas in vitro com diferentes inóculos de hRSV, antes ou depois de terem sido incubadas com as NETs (0.5-16 µg/mL). Células apenas infectadas apresentaram redução na taxa metabólica, intensa coloração com azul de trypan, formação de numeros e volumosos sincícios. Comparativamente, o contato das células com as NETs, antes da infeçcão viral (MOI 0.1), resultou em melhora da taxa metabólica e da viabilidade celular, acompanhadas de redução no número e dimensão dos sincícios formados. O aumento do inóculo viral (MOIs 0.5 e 1) reduziu tais efeitos benéficos. Células já infectadas e, que foram pós-tratadas com as NETs, apresentaram sincícios mais volumosos, que numericamente estavam reduzidos. O aumento na concentração das NETs (≥ 8µg/mL) agravou a mortalidade celular, o que refletiu numa redução do número e da dimensão dos sincícios formados. Análises in silico, foram favoráveis à geração de complexos proteína F/MPO e proteína F/Catapsina-G, envolvendo sítios de neutralização viral. Em resumo, nas fases precoces da infecção, onde a concentração das NETs e a carga viral estão reduzidas, há um predominante efeito benéfico das NETs, que contribui na captura do virion e na proteção de células não infectadas. A intensa geração das NETs em fases mais tardias da infecção, causa agravamento da morte celular. O detalhamento dos mecanismos envolvidos no equilibrado papel das NETs, na imunopatologia das doenças respiratórias, fornece subsídios para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas que modulem a geração e a função das NETs no tecido pulmonar.