Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2018 |
| Autor(a) principal: |
Paulo, Jéssica Fiorotti de
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| Orientador(a): |
Bittencourt, Vânia Rita Elias Pinheiro |
| Banca de defesa: |
Gólo, Patrícia Silva,
Morena, Diva Denelle Spadacci |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
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| Departamento: |
Instituto de Veterinária
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Palavras-chave em Inglês: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/11817
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Resumo: |
Metarhizium spp. é um fungo amplamente utilizado no controle biológico de artrópodes. Os hemócitos, as células presentes no hemolinfa, estão envolvidos na resposta imune destes ectoparasitas, principalmente quando desafiados por patógenos. A obtenção dessas células é dificultosa e muito pouco se conhece sobre a morfologia dos hemócitos de Rhipicephalus microplus e sua resposta às infecções. O presente estudo teve como objetivos o estabelescimento de um melhor protocolo para a obtenção de hemócitos de fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus e a análise morfológica dessas células em condições fisiológicas e quando infectadas por fungos artropodopatogênicos marcados ou não com GFP. Foram testados diferentes velocidades de centrifugação da hemolinfa, e o método com maior viabilidade celular e alta concentração de células foi aplicado após a inoculação fúngica em fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Após a exposição por imersão, os parâmetros das fêmea ingurgitadas avaliados foram o peso da massa de ovos, índice de produção de ovos, período de incubação das larvas, índice nutricional e o percentual de controle. Posteriormente, a coleta de hemolinfa foi realizada e os hemócitos foram separados do plasma, ressuspensos em PBS e quantificados na câmara de Neubauer. Além da quantificação, os hemócitos foram submetidos às colorações de hematoxilina e eosina e PAS, além de serem submetidos à microscopia eletrônica de transmissão. Para a padronização, a centrifugação em 500 × g durante três min a 4 ° C foi considerada mais eficiente, e foi aplicada após inoculação de fungos. Posteriormente, no bioensaio por imersão, os resultados dos dois isolados fúngicos foram muito parecidos entre si, demonstrando que a marcação molecular não influenciou na virulência dos fungos. No entanto, para a quantificação de hemócitos, a inoculação foi utilizada e todos os isolados foram capazes de diminuir a concentração em aproximadamente 80% em comparação com a quantidade de hemócitos de fêmeas não infectadas. Em condições fisiológicas foram identificados cinco tipos de hemócitos (pró-hemócitos, granulócitos, esferulócitos, plasmatócitos e oenocitóides) e quando as fêmeas foram infectadas com Metarhizium, estas células apresentavam em processo de morte celular e algumas células também possuiam a internalização do fungo em questão, sugerindo a presença de um processo de fagocitose. Desta forma, sugere-se que a infecção por fungos entomopatogênicos pode gerar alterações nos hemócitos de R. microplus e influenciar diretamente na concentração dessas células. Este trabalho foi o primeiro a realizar microscopia eletrônica de transmissão em hemócitos desta espécie de carrapato e foi o primeiro a descrever alterações celulares decorrentes de infecção fúngica através de microscopia eletrônica de transmissão. |
