Expressão endógena do hormônio do crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) em Pichia pastoris

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Linhares, Regiane Monteiro
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/6167754825212655, https://orcid.org/0000-0002-5447-5728
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Amazonas; Instituto de Ciências Biológicas; Brasil; UFAM; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: Tambaqui (Peixe); Expressão heteróloga intracelular; Levedura recombinante; Toxicidade do indutor; Leucina (Aminoácido); CIÊNCIAS BIOLÓGICAS; Hormônio de crescimento; Expressão intracelular; Expressão heteróloga; PGK1; Tambaqui
• Link de acesso: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8319

Na região norte, onde há o maior consumo de pescado, o tambaqui (Colossoma macropomum) é o peixe mais consumido. Para possibilitar o aumento da produção do tambaqui, é necessário compreensão sobre a fisiologia, ecologia, dentre outros conhecimentos, para uma otimização e padronização de tecnologias a serem aplicadas na produção desse peixe. Recentemente, o cDNA do hormônio de crescimento de tambaqui foi construído por síntese química e expresso em P. pastoris sob o controle do promotor pAOX1 dessa levedura. Considerando a toxicidade do indutor deste promotor, este trabalho tem como principal objetivo a expressão heteróloga intracelular do hormônio de crescimento de tambaqui (rtGH) na levedura Pichia pastoris, utilizando um promotor constitutivo, o pPGK1. Foram construídos dois vetores para expressão de rtGH, sendo que esses vetores foram linearizados e integrados no genoma de P. pastoris linhagem M12 (auxotrófica para o aminoácido leucina). Os clones transformantes foram selecionados inicialmente no meio seletivo MD seguido de uma segunda seleção por crescimento em meio MD com o antibiótico G418. Para confirmação das colônias transformantes, foi realizado identificação do gene rtGH por meio de PCR, enquanto a confirmação da expressão intracelular da proteína foi realizada por imunodot e SDS-PAGE/Western Blotting. Como a expressão do tGH ocorreu em níveis baixos, esforços deverão ser realizados no sentido de se identificar a razão da baixa produção, para que se possa obter a expressão do hormônio em níveis em que se possa utilizar a levedura recombinante para suplementação de ração para peixes.