Expressão endógena do hormônio do crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) em Pichia pastoris - Linhares, Regiane Monteiro (2021)
Na região norte, onde há o maior consumo de pescado, o tambaqui (Colossoma macropomum) é o peixe mais consumido. Para possibilitar o aumento da produção do tambaqui, é necessário compreensão sobre a fisiologia, ecologia, dentre outros conhecimentos, para uma otimização e padronização de tecnologias a serem aplicadas na produção desse peixe. Recentemente, o cDNA do hormônio de crescimento de tambaqui foi construído por síntese química e expresso em P. pastoris sob o controle do promotor pAOX1 dessa levedura. Considerando a toxicidade do indutor deste promotor, este trabalho tem como principal objetivo a expressão heteróloga intracelular do hormônio de crescimento de tambaqui (rtGH) na levedura Pichia pastoris, utilizando um promotor constitutivo, o pPGK1. Foram construídos dois vetores para expressão de rtGH, sendo que esses vetores foram linearizados e integrados no genoma de P. pastoris linhagem M12 (auxotrófica para o aminoácido leucina). Os clones transformantes foram selecionados inicialmente no meio seletivo MD seguido de uma segunda seleção por crescimento em meio MD com o antibiótico G418. Para confirmação das colônias transformantes, foi realizado identificação do gene rtGH por meio de PCR, enquanto a confirmação da expressão intracelular da proteína foi realizada por imunodot e SDS-PAGE/Western Blotting. Como a expressão do tGH ocorreu em níveis baixos, esforços deverão ser realizados no sentido de se identificar a razão da baixa produção, para que se possa obter a expressão do hormônio em níveis em que se possa utilizar a levedura recombinante para suplementação de ração para peixes.