Clonagem e expressão do CDNA codificador do hormônio de crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) na levedura Pichia pastoris

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Pinto, Elson Antonio Sadalla
• Outros Autores: https://lattes.cnpq.br/9786797594989755
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Amazonas; Instituto de Ciências Biológicas; Brasil; UFAM; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: Tambaqui (Peixe) - Pesquisa; Peixes - Crescimento; CIENCIAS BIOLOGICAS; Hormônio de crescimento; Tambaqui; Expressão heteróloga; Pichia pastoris; Growth hormone; Heterologous expression
• Link de acesso: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/10663

Estudos genéticos envolvendo a busca, clonagem e expressão de genes codificadores de proteínas associadas a importantes processos fisiológicos e características vantajosas do ponto de vista econômico têm tornado as pesquisas biotecnológicas cada vez mais promissoras. Pela sua importância zootécnica, os genes codificadores do hormônio de crescimento (GH) de diversas espécies de peixes têm sido isolados, clonados e expressos em sistemas de expressão heteróloga. O tambaqui (Colossoma macropomum), espécie de peixe amazônica considerada promissora para a aquicultura, tem sido objeto de extensas pesquisas biotecnológicas mirando a ampliação da capacidade produtiva da espécie. Neste trabalho, objetivou-se expressar o cDNA do GH de tambaqui na levedura metilotrófica Pichia pastoris. A sequência nucleotídica da região estrutural do cDNA do GH de tambaqui foi otimizada com os códons preferenciais de P. pastoris e obtida por síntese química e subclonada no vetor de expressão e secreção pPIC9. A expressão foi regulada pelo promotor AOX1 e a proteína recombinante endereçada para o sobrenadante da cultura por ação do peptídio sinal fator α de Saccharomyces cerevisiae. A análise em gel SDS-PAGE revelou a presença de uma banda proteica de aproximadamente 23 kDa, a qual foi confirmada ser o GH recombinante de tambaqui (rtGH) através de análise Western blotting. Futuramente, rtGH deverá ser analisado quanto a sua eficiência na aceleração do crescimento de juvenis de tambaqui com vista à possibilidade de uso na produção aquícola, o que decerto representará inovação nas tecnologias de cultivos de peixes nativos da Amazônia.