Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2019 |
| Autor(a) principal: |
Delvoss, Cleyson Mathias Morais
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| Orientador(a): |
Eger, Iriane
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| Banca de defesa: |
Costa, Michele Dietrich Moura
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Pavanelli, Wander Rogério
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| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual de Ponta Grossa
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Ciências Biomédicas
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| Departamento: |
Setor de Ciências Biológicas e da Saúde
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
http://tede2.uepg.br/jspui/handle/prefix/4137
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Resumo: |
Atualmente poucos fármacos estão disponíveis para o tratamento da doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. Destes fármacos, a maioria causa severos efeitos colaterais e nenhum deles apresenta 100% de cura parasitológica. A triagem de novos compostos anti-T. cruzi são iniciados com testes in vitro contra epimastigotas e amastigotas intracelulares. Para as formas amastigotas, clinicamente relevantes por apresentarem-se no hospedeiro mamífero, o efeito tripanocida é principalmente avaliado pela contagem microscópica de parasitos residuais. Apesar de reprodutível, esta técnica é morosa e depende da experiência do microscopista. Este trabalho objetiva a padronização de um método de triagem de compostos tripanocidas através da detecção de fluorescência emitida por TcGFP. Epimastigotas da cepa Y (108 parasitos/ml) cultivados em meio LIT+10%SFB foram transfectados com o plasmídeo pROCKGFPNeo e selecionados por diluição seriada e pelo antibiótico de resistência G418. Após seleção, os epimastigotas mostraram expressão de GFP homogênea e estável. A expressão da GFP também se manteve estável em tripomastigotas e amastigotas intracelulares. A transfecção não afetou os padrões de replicação in vitro dos epimastigotas, nem sua suscetibilidade ao benzonidazol e também não alterou a capacidade da cepa de infectar e de se replicar em células Vero E6. Através de fluorimetria foi verificado que há correlação direta entre intensidade de fluorescência e concentração de epimastigotas (R2=0,9986) e amastigotas intracelulares (R2=0,9559) de TcGFP. Para validar a técnica fluorimétrica para triagens de compostos tripanocidas, epimastigotas e células contendo amastigotas intracelulares de TcGFP foram incubados com diferentes concentrações de benzonidazol por 48 e 24 horas, respectivamente. Os resultados mostraram que para epimastigotas o método proposto restringe-se a teste de compostos que causem a lise dos parasitos, devido a possibilidade de detecção da fluorescência emitida pela GFP retida em parasitos inviáveis não lisados. Para as formas amastigotas intracelulares, o método fluorimétrico proposto pode ser aplicado, substituindo a morosa contagem microscópica. |
