Influencia do Fator Inibidor de Leucemia (LIF), Kit Ligand (Kl), e Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais de pequenos ruminantes

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Luz, Valesca Barreto
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Biotecnologia; Folículos Pré-Antrais; Pequenos Ruminantes
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=72889

<div style=""><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman; color: rgb(0, 0, 0);">A presente tese foi concebida a partir de experimentos divididos em duas fases. A fase I teve&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">como objetivo avaliar o efeito de diferentes concentrações do Fator Inibidor de Leucemia&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">(LIF) sozinho ou associado ao FSH no cultivo </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Italic; font-style: italic;">in vitro</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;"> (CIV) de folículos pré-antrais (FOPA)&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">secundários isolados caprinos (parte 1) e ovinos (parte 2). Na fase II, somente na espécie&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">ovina, avaliou-se o efeito da adição de Kit Ligand (KL), Fator de Crescimento Semelhante à&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">Insulina-I (IGF-I) ou ambos ao melhor meio de cultivo obtido na fase I (parte 2). Em todas as&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">fases, os folículos secundários foram isolados por microdissecção e cultivados por 18 dias em&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: TTD4t00;">&#945;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">MEM</span><span style="font-weight: normal; font-size: 8.03766pt; font-family: Times-Roman;">+ </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">, a 39 °C e 5% de CO</span><span style="font-weight: normal; font-size: 8.03766pt; font-family: Times-Roman;">2</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;"> em ar. Durante o cultivo, os folículos foram avaliados quanto à&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">morfologia, formação antral e crescimento. Após o cultivo, oócitos foram submetidos à&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">maturação </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Italic; font-style: italic;">in vitro</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;"> (MIV) e avaliados quanto à viabilidade e retomada de meiose com&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">marcadores fluorescentes. Dos melhores tratamentos das fases I (parte 2) e II foi avaliada a&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">capacidade de oócitos ovinos crescidos </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Italic; font-style: italic;">in vitro</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;"> para a produção de embriões após ativação&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">partenogenética (fase I: parte 2), bem como FIV e partenogênese (fase II). Na fase I (parte 1),&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">baixas taxas de extrusão folicular (p&lt;0.05) foram obtidas quando os FOPA foram cultivados&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">no controle e em 10 ng/ml LIF (LIF10) independente da presença de FSH. Após 18 dias de&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">cultivo, a percentagem de formação de antro no grupo LIF50+FSH foi significativamente&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">inferior ao grupo controle e LIF10. A taxa de retomada de meiose foi significativamente&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">superior no grupo LIF50 em comparação ao controle e LIF10. Vale salientar que a única&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">Metáfase II observada nesse experimento foi obtida quando os folículos foram cultivados em&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">LIF50+FSH. Com relação à parte 2 da fase I, quando comparados ao controle, a formação de&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">antro foi aumentada em folículos cultivados em LIF10+FSH. Entretanto, uma taxa&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">numericamente maior de MII (29,63%) foi obtida quando os folículos foram cultivados em&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">LIF50. Após ativação partenogenética, sete partenotos foram produzidos. Na fase II, a adição&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">de IGF-I promoveu aumento do diâmetro folicular no final do CIV, enquanto que a&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">integridade folicular, formação antral e retomada da meiose foram melhoradas com a adição&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">de KL. Além disso, oócitos crescidos </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Italic; font-style: italic;">in vitro</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;"> oriundos desse tratamento resultaram em&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">partenotos (35,7%) e embriões (21,5%). Concluindo, o LIF50 associado ao FSH aumentou a&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">produção de oócitos maturos a partir de FOPA caprinos crescidos </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Italic; font-style: italic;">in vitro</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">. Além disso, em&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">ovinos foi possível a produção </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Italic; font-style: italic;">in vitro</span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;"> de embriões utilizando oócitos oriundos de FOPA&nbsp;</span><span style="font-weight: normal; font-family: Times-Roman; font-size: 11.9965pt;">cultivados na presença de LIF e KL.&nbsp;</span><span style="font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Bold;">Palavras-chave: </span><span style="font-weight: normal; font-size: 11.9965pt; font-family: Times-Roman;">Pequenos ruminantes, FOPA, embrião, LIF, KL, IGF-I.</span></div>