Influencia do Fator Inibidor de Leucemia (LIF), Kit Ligand (Kl), e Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais de pequenos ruminantes - Luz, Valesca Barreto (2012)
A presente tese foi concebida a partir de experimentos divididos em duas fases. A fase I teve como objetivo avaliar o efeito de diferentes concentrações do Fator Inibidor de Leucemia (LIF) sozinho ou associado ao FSH no cultivo in vitro (CIV) de folículos pré-antrais (FOPA) secundários isolados caprinos (parte 1) e ovinos (parte 2). Na fase II, somente na espécie ovina, avaliou-se o efeito da adição de Kit Ligand (KL), Fator de Crescimento Semelhante à Insulina-I (IGF-I) ou ambos ao melhor meio de cultivo obtido na fase I (parte 2). Em todas as fases, os folículos secundários foram isolados por microdissecção e cultivados por 18 dias em αMEM+ , a 39 °C e 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo, os folículos foram avaliados quanto à morfologia, formação antral e crescimento. Após o cultivo, oócitos foram submetidos à maturação in vitro (MIV) e avaliados quanto à viabilidade e retomada de meiose com marcadores fluorescentes. Dos melhores tratamentos das fases I (parte 2) e II foi avaliada a capacidade de oócitos ovinos crescidos in vitro para a produção de embriões após ativação partenogenética (fase I: parte 2), bem como FIV e partenogênese (fase II). Na fase I (parte 1), baixas taxas de extrusão folicular (p<0.05) foram obtidas quando os FOPA foram cultivados no controle e em 10 ng/ml LIF (LIF10) independente da presença de FSH. Após 18 dias de cultivo, a percentagem de formação de antro no grupo LIF50+FSH foi significativamente inferior ao grupo controle e LIF10. A taxa de retomada de meiose foi significativamente superior no grupo LIF50 em comparação ao controle e LIF10. Vale salientar que a única Metáfase II observada nesse experimento foi obtida quando os folículos foram cultivados em LIF50+FSH. Com relação à parte 2 da fase I, quando comparados ao controle, a formação de antro foi aumentada em folículos cultivados em LIF10+FSH. Entretanto, uma taxa numericamente maior de MII (29,63%) foi obtida quando os folículos foram cultivados em LIF50. Após ativação partenogenética, sete partenotos foram produzidos. Na fase II, a adição de IGF-I promoveu aumento do diâmetro folicular no final do CIV, enquanto que a integridade folicular, formação antral e retomada da meiose foram melhoradas com a adição de KL. Além disso, oócitos crescidos in vitro oriundos desse tratamento resultaram em partenotos (35,7%) e embriões (21,5%). Concluindo, o LIF50 associado ao FSH aumentou a produção de oócitos maturos a partir de FOPA caprinos crescidos in vitro. Além disso, em ovinos foi possível a produção in vitro de embriões utilizando oócitos oriundos de FOPA cultivados na presença de LIF e KL. Palavras-chave: Pequenos ruminantes, FOPA, embrião, LIF, KL, IGF-I.