DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS NA PRESENÇA DE KIT LIGAND (KL) E PROTEÍNA MORFOGENÉTICA ÓSSEA 15 (BMP-15)

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: LIMA, ISADORA MACHADO TEIXEIRA
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Folículos Pré-Antrais
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=92509

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Esse estudo teve como objetivos: 1) quantificar os níveis de RNAm para os receptores de kit ligand (KL) e proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15) em folículos ovarianos caprinos utilizando RT-PCR em tempo real; 2) investigar o papel do KL, associado ou não ao hormônio folículo estimulante (FSH) em meio dinâmico, sobre a sobrevivência, ativação e crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados in situ; 3) avaliar os efeitos do KL e da BMP-15 sobre a sobrevivência, formação de antro e crescimento in vitro de folículos secundários caprinos isolados, bem como sobre a retomada da meiose de seus oócitos. Para o cultivo in situ, fragmentos ovarianos foram cultivados por 16 dias em meio &#945;-MEM+ contendo KL (50 ng/mL) e/ou FSH (50 ng/mL) dos dias 0 a 8 e/ou 8 a 16 de cultivo. Antes e após o cultivo, os fragmentos foram analisados por histologia, microscopia eletrônica de transmissão e microscopia de fluorescência, sendo os folículos mensurados e classificados em primordiais, transição, primários e secundários, bem como em normais ou atrésicos. Quanto ao cultivo de folículos isolados, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por 18 dias em &#945;-MEM+ suplementado ou não com diferentes concentrações de BMP-15 (10, 50 ou 100 ng/mL) ou KL (50 ou 100 ng/mL), sendo este último fator testado na ausência ou presença de FSH. Após o cultivo, os oócitos foram destinados à maturação in vitro e posteriormente avaliados quanto à viabilidade e retomada da meiose. Os resultados da RT-PCR mostraram que, com a progressão de folículos primários para secundários, houve uma redução nos níveis de RNAm para o receptor do KL (c-kit) e para um receptor da BMP-15 (BMPRII). Além disso, maiores níveis de RNAm foram observados para c-kit nos complexos cumulus-oócito de pequenos e grandes folículos antrais em comparação às suas respectivas células da granulosa/teca, ocorrendo o mesmo para o BMPRII nos grandes folículos antrais. Verificou-se ainda níveis maiores de RNAm para o receptor tipo I da BMP-15 (BMPRIB) nas células da granulosa/teca de grandes folículos antrais em comparação àquelas de pequenos antrais. Após 16 dias de cultivo in situ, observou-se que o meio dinâmico contendo KL até o dia 8 e FSH do dia 8 ao dia 16 manteve a integridade ultraestrutural e induziu a ativação e o crescimento folicular. Quanto aos folículos isolados, a adição de 50 e/ou 100 ng/mL de KL ao cultivo, na ausência de FSH, promoveu a sobrevivência e melhorou a formação de antro, crescimento oocitário e retomada da meiose após 18 dias. Já 50 ng/mL de BMP-15 manteve a ultraestrutura e estimulou a formação de antro e o crescimento de folículos isolados. Em conclusão, os resultados deste estudo mostraram que os RNAm para c-kit, BMPRIB e</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">11</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">BMPRII foram detectados em todas as categorias foliculares e tipos celulares investigados. A utilização de KL e FSH de forma dinâmica em cultivo in situ, bem como de KL (50 e/ou 100 ng/mL) e BMP-15 (50 ng/mL) em cultivo de folículos secundários isolados, promoveu a manutenção da sobrevivência folicular e o desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos.</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Palavras-chave: KL. BMP-15. Folículos pré-antrais. Cultivo in vitro. Caprinos</span></font></div>