Avaliação do papel do ferro e de proteínas envolvidas em seu metabolismo na infecção in vitro de macrófagos por Leishmania amazonensis ou Leishmania major

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Oliveira, Camila Victória Sousa
• Orientador(a): Veras, Patrícia Sampaio Tavares
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/15216

A leishmaniose é uma antropozoonose causada por protozoários do gênero Leishmania e é considerada uma das principais doenças negligenciadas. Modelos experimentais são amplamente utilizados para uma melhor compreensão da doença e dos mecanismos relacionados à resistência e susceptibilidade à infecção. Macrófagos de camundongos CBA controlam a infecção por Leishmania major ao passo que são permissivos a Leishmania amazonensis. Além disso, estudos baseados em abordagem proteômica demonstraram padrões distintos de expressão proteica em macrófagos derivados de medula óssea (BMMΦ) infectados por essas espécies de Leishmania. Dentre as proteínas diferentemente expressas, foram identificadas proteínas envolvidas no metabolismo de ferro moduladas positivamente em macrófagos infectados por L. amazonensis. Adicionalmente, embora ainda existam controvérsias, diversos estudos têm abordado a participação do elemento ferro na interação parasito-hospedeiro e no estabelecimento das infecções por tripanossomatídeos, incluindo Leishmania. Assim, para melhor compreender os mecanismos envolvidos nessa doença, o presente estudo buscou explorar o modelo comparativo de resistência e suscetibilidade do camundongo CBA para determinar o papel do ferro na infecção por Leishmania. Nossa hipótese é que a expressão de proteínas envolvidas no metabolismo de ferro é modulada diferentemente em macrófagos de camundongos CBA infectados por L. amazonensis, em comparação à L. major, favorecendo a sobrevivência intracelular do parasito. Nosso objetivo foi avaliar a expressão de proteínas que participam do metabolismo de ferro, como receptor de transferrina (Tf), CD71, e heme oxigenasse-1, HO-1, e determinar o efeito da modulação da disponibilidade de ferro na infecção por Leishmania. Observamos maior expressão de HO-1 em BMMΦ infectados por L. amazonensis (18,34 ± SD ng/mL), quando comparados a BMMΦ infectados por L. major (7,07 ± SD ng/mL), utilizando ELISA. Maior expressão de CD71 também foi observada na infecção por L. amazonensis (MFI 2.103) em comparação à infecção por L. major (MFI 472), utilizando FACS, além de uma maior ligação e captação de HoloTf (Tf carregada com ferro). Embora tenha sido observado que essas proteínas encontram-se diferentemente expressas em BMMΦ infectados por essas duas espécies de Leishmania, não foram observadas diferenças significativas na concentração intracelular do ferro. Em seguida, ensaios funcionais a partir da modulação da disponibilidade intracelular de ferro foram realizados com o objetivo de avaliar seu papel no desfecho da infecção por Leishmania. Os resultados mostraram que a depleção de ferro reduz em 90% o percentual de BMMΦ infectados por L. amazonensis e 70% dos infectados por L. major. Adicionalmente, a suplementação de ferro aumenta o percentual de BMMΦ infectados por L. amazonensis, de 69,64 para 82,79%, e a carga parasitária, de 2,996 para 4,001 parasitos/célula, assim como a viabilidade intracelular de L. amazonensis e L. major. Em conjunto, os dados obtidos nesse estudo indicam que, apesar de L. amazonensis modular positivamente a expressão de proteínas envolvidas no metabolismo de ferro, esse metal apresenta um papel importante na infecção pelas duas espécies de Leishmania, favorecendo a sobrevivência intracelular desse parasito.