Investigação da síntese de eicosanoides durante a leishmaniose: uma análise do parasito ao hospedeiro.

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Andrade, Yasmin Monara Ferreira de Sousa
• Orientador(a): Borges, Valéria de Matos
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/58291

Corpúsculos lipídicos (CLs) são organelas citoplasmáticas responsáveis pelo armazenamento de lipídios neutros e pelo metabolismo de mediadores em muitos tipos de células. Dados recentes mostram formação de CLs e produção de eicosanoides em Leishmania. Contudo, estudos da formação e modulação de CLs, bem como, da síntese de lipídios bioativos em diferentes espécies de Leishmania ainda não foram conduzidos. Assim, primeiramente foram avaliadas por microscopia ótica a formação de CLs em L. infantum, L. amazonensis e L. braziliensis, bem como, a modulação destas organelas estimuladas com os ácidos eicosapentaenóico (EPA), docosahexaenoico (DHA) e araquidônico (AA). Os mediadores produzidos por estas espécies foram quantificados por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (HPLC-MS) e a expressão das proteínas GP63 e PGFS foram avaliadas por imunoblotting e ELISA. Por fim, as sequencias genômicas e os resíduos do sítio ativo dessas proteínas foram analisadas em espécies de Leishmania do Velho e Novo Mundo. Observamos maior número de CLs durante metaciclogênese e após estimulação com EPA, DHA e AA, em L. infantum e L. braziliensis. Além disso, identificamos 12 lipídios bioativos, estimulados principalmente por AA. A partir das análises in silico, notamos que as sequências de GP63 e PGFS são mais similares entre as espécies de mesmo tropismo e que os resíduos do sítio ativo de GP63 foram mais alterados, ao contrário dos resíduos de PGFS. Também observamos que GP63 foi mais produzida na fase logarítmica dos parasitos, ao contrário de PGFS que foi mais expressa na fase estacionária. No contexto da interação parasito-hospedeiro, ainda não foi investigado a síntese de eicosanoides in situ durante a fase crônica da leishmaniose visceral (LV). Desse modo, utilizamos Hamsters Golden Syrian (Mesocricetus auratus) machos, com 6 a 8 semanas de idade, que foram infectados intraperitonealmente com 107 L. infantum/mL. Após 150 dias de infecção, avaliamos as alterações clínicas e histológicas no baço e fígado. Através da HPLC-MS/MS demonstramos pela primeira vez a produção de eicosanoides no plasma, baço e fígado dos animais. Notamos que o aumento da produção dos mediadores HETEs está correlacionado com a gravidade da LV. Portanto, este estudo abre perspectivas para compreensão da biologia de Leishmania e sua interação com o hospedeiro, bem como amplia o conhecimento para elaboração de novas estratégias antiparasitárias