Atuação de DNA metiltransferases e DNA desmetilases no desenvolvimento do testículo

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Sousa, Anaíde Silva
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Desenvolvimento do testículo; DNA methylation; Epigenetic regulation; Metilação do DNA; Regulação epigenética; Testis development
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-05062023-114616/

O desenvolvimento sexual é um processo complexo que envolve muitos fatores, em especial, genéticos e ambientais. Compreender o desenvolvimento testicular em aves durante a embriogênese é importante para o aprimoramento do conhecimento em diversas áreas, desde o desenvolvimento sexual humano até a conservação das espécies. A metilação do DNA é um importante mecanismo epigenético envolvido na regulação da expressão gênica e está envolvida com a gonadogênese. Em mamíferos, o início da regulação epigenética do testículo foi descrito após a determinação do sexo, porém ainda não se sabe ao certo como as enzimas envolvidas com os processos epigenéticos atuam. A galinha é um bom modelo animal de estudo de genes envolvidos na regulação epigenética. Nosso objetivo foi inicialmente investigar a expressão de genes responsáveis pela metilação e desmetilação do DNA em diferentes estágios do desenvolvimento testicular de embriões de Gallus gallus domesticus, bem como identificar possíveis regiões reguladoras da metilação do DNA em genes envolvidos na diferenciação testicular. Foram utilizados ovos fertilizados de galinha, e as amostras de testículos foram coletadas de embriões durante diferentes estágios do desenvolvimento gonadal (HH32, HH35, HH38, HH41 e HH45). O RNA total foi isolado para posterior síntese de cDNA. A expressão de seis genes alvo, sendo três que codificam DNA metiltransferases (DNMT1, DNMT3A e DNMT3B) e três que codificam DNA desmetilases Ten-eleven-translocation (TET1, TET2 e TET3), foi avaliada por RT-qPCR usando SYBR™ Green. β-actina e Proteína Ribossômica L5 (RPL5) foram usados como genes de referência. Em seguida, as ilhas CpGs foram identificadas nas regiões promotoras dos genes marcadores de diferenciação do testículo DMRT1, AMH e SOX9 utilizando o Programa MethPrimers, e uma rede de interação gênica foi construída utilizando o software STRING v10. No estágio HH32, houve aumento na expressão dos genes TET1 e TET3. Já os genes DNMT3B e TET2 apresentaram aumento significativo nos estágios finais HH41 e HH45. O gene DNMT1 apresentou expressão significativa no início, meio e fim da diferenciação testicular. Nossos resultados sugerem que os genes analisados desempenham um papel relevante na regulação epigenética ao longo do desenvolvimento do testículo, e poderão contribuir com informações significativas sobre esse processo para aves. Nossas análises mostraram evidências de ilhas CpGs nas regiões promotoras dos genes DMRT1, AMH e SOX9, e a rede de interação gênica sugere uma forte ligação entre eles.