Rastreabilidade in vivo de células germinativas primordiais do bagre-sapo Pseudopimelodus mangurus

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Alpala, Jenyffer Mairely Rosero
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Banco de genes; Conservação; Conservation; Desenvolvimento inicial; Early development; Genebanking; Neotropical fish; Peixes neotropicais; PGC
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-26052023-092830/

O bagre sapo Pseudopimelodus mangurus é um peixe siluriforme distribuído na bacia do rio Prata, cuja população vem se esgotando na última década. Estratégias de conservação e manutenção da diversidade genética tornam-se então necessárias, como o criobanco e a produção de quimeras germinativas por meio do transplante de células germinativas primordiais (PGCs). O objetivo deste trabalho foi estabelecer um procedimento para rastreabilidade de PGCs de bagre sapo, utilizando as regiões 3′- UTR de mRNAs endógenos ddx4 e dnd1 a fim de sintetizar mRNA artificial (gfp-Pm- ddx4 3′UTR/ DsRed -Pm-ddx4 3′UTR) e então injetados em zigotos (1 célula) de P. mangurus. Além disso, o mesmo mRNA foi utilizado em espécies Characiformes (Astyanax altiparanae e Prochilodus lineatus) para verificar a aplicação em outras espécies. Os genes ddx4 e dnd1 foram escolhidos como marcadores, considerando sua expressão durante o desenvolvimento embrionário e em tecidos larvais e adultos de P. mangurus. Células GFP ou DsRed positivas (presumíveis PGCs) foram observadas pela primeira vez por fluorescência em P. mangurus na fase de segmentação com 28 somitos, na fase gástrula com 70% de epibolia em A. altiparanae e segmentação com 6 somitos em P. lineatus. A porcentagem de marcação em embriões de P. mangurus (n = 521) foi de 3%, em A. altiparanae (n = 512) foi de 29%, em P. lineatus (n = 253) foi de 16%. A visualização de PGCs em P. mangurus foi possível apenas quando mRNA contendo o repórter DsRed foi usado. A sobrevivência embrionária foi de 12,2 ± 1,8% (p = 0,0006) em P. mangurus. No experimento de expressão gênica semiquantitativa, verificou-se a expressão de ddx4 e dnd1 apenas no desenvolvimento embrionário e nas gônadas, desde a fase de zigoto até a blástula, diminuindo a intensidade das bandas na gástrula com 50% de epibolismo e clivagem, mas a expressão ainda foi observada na fase de eclosão. Em tecidos adultos, ddx4 foi expresso em testículo e ovário, enquanto dnd1 foi expresso apenas em ovário. Os resultados indicaram que a marcação de PGCs em outras espécies foi mais eficiente do que em P. mangurus, sugerindo que existem problemas intrínsecos para a visualização de PGCs nesta espécie, principalmente antes da eclosão. Os dados acima permitem, pela primeira vez na literatura, a rastreabilidade in vivo de PGCs no bagre sapo e espécies de Characiformes usando ddx4 3′UTR de uma espécie Neotropical. Os resultados obtidos neste estudo podem ser aplicados para produzir quimeras germinativas como uma ação conservacionista e estabelecimento de criobancos para P. mangurus.