Análise enantiosseletiva do praguicida imazamox: estudos de permeabilidade com células CACO-2 e metabolismo in vitro com microssomas hepáticos de humanos

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Serpellone, Carolina Oliveira
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Análise enantiosseletiva; CACO-2 Cells; Células CACO-2; Chiral pesticide; CYP450 inhibition; Enantioselective analysis; Human liver microsomes; Imazamox; In vitro metabolism; Inibição do CYP450; Metabolismo in vitro; Microssomas hepáticos de humanos; Praguicida quiral
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59138/tde-26072023-075832/

O imazamox (IMX) é um herbicida quiral da classe imidazolinona indicado para combater plantas daninhas. Em ambientes aquirais enantiômeros se comportam de maneira idêntica apresentando as mesmas propriedades físico-químicas, no entanto, quando colocados em um ambiente quiral (ambientes bióticos) podem apresentar diferentes comportamentos e interações. Nesse trabalho foram realizados estudos in vitro de permeabilidade e metabolismo da mistura racêmica e dos enantiômeros isolados do IMX empregando células CACO-2 e microssomas hepáticos de humanos, respectivamente. Além disso, foi avaliado a capacidade do IMX em inibir as principais enzimas do CYP450 envolvidas no metabolismo de fármacos. Para tanto, dois métodos cromatográficos enantiosseletivos foram desenvolvidos e otimizados através do planejamento fatorial experimental. As condições empregadas para avaliação do IMX nos estudos com células CACO-2 foram empregando a coluna Chiralcel-OD-H® (150 x 4,6 mm; 5µm) e fase móvel contendo H2O:ACN (79: 21 v/v) e vazão de 0,8 mL min-1 . Para quantificação dos estudos de permeabilidade foi realizado a validação do método que atendeu os parâmetros de seletividade, linearidade, efeito residual, limite inferior de quantificação, precisão e exatidão e estabilidade. Os valores obtidos de permeabilidade aparente (Papp) para o rac-IMX, (+)-IMX e (-)-IMX foram respectivamente, 3,57 x 10-5 , 5,54 x 10-5 e 7,26 x 10-5 cm s-1 , indicando que os três compostos avaliados podem ser classificados como de alta permeabilidade (Papp>1 × 10-5 cm s-1 ). Já nos estudos de metabolismo in vitro com microssomas hepáticos de humanos, o método analítico empregado para análise do IMX e seu metabólito Des-IMX utilizou a mesma coluna citada acima, entretanto a eluição dos analitos foi realizada por gradiente e a vazão empregada foi de 0,38 mL min-1 . A partir dos resultados obtidos no estudo prévio de metabolismo in vitro foi constatado que as enzimas do CYP450 não são capazes de metabolizar a mistura racêmica do IMX e nem os enantiômeros isolados do IMX nas condições avaliadas nesse estudo. Já na avaliação do potencial inibitório do IMX frente as principais enzimas do CYP450 envolvidas no metabolismo de fármacos o rac-IMX não diminuiu a atividade enzimática remanescente (AR%) das isoformas avaliadas, entretanto, avaliando os enantiômeros isolados, o (+)- IMX apresentou um potencial inibitório frente a isoforma CYP3A4/5 (AR% <50%). Os resultados desse trabalho mostraram que apesar da alta permeabilidade apresentada pela praguicida, provavelmente o IMX não é substrato para as enzimas do CYP450 e portanto, o metabolismo desse substrato por fase I é pouco provável.