Avaliação funcional da via da interleucina-1 em queratinócitos que expressam os oncogenes de HPV

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Nunes, Rafaella Almeida Lima
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Câncer cervical; Cervical cancer; HPV; Innate immune response; Interleucina-1; Interleucina-18; Interleukin-1; Interleukin-18; Prognosis; Prognóstico; Resposta imune inata
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5155/tde-02022021-095410/

Introdução: A resposta imune desempenha um papel importante na eliminação das infecções causadas pelo HPV. Como estratégia de evasão do sistema imunológico, o vírus pode modular a produção e secreção de citocinas pelas células infectadas. Além disso, a resposta imune pode contribuir para a criação de um quadro de inflamação crônica, que favorece a progressão das lesões relacionadas ao vírus e o desenvolvimento do câncer. Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da via da interleucina-1, mais especificamente IL-1alfa, IL-1beta e IL-18, importantes citocinas pró-inflamatórias, no estabelecimento e progressão dos tumores cervicais. Material e métodos: Queratinócitos normais e transduzidos com os oncogenes E6 e/ou E7 de HPV16, além das linhagens tumorais de origem cervical C33, SiHa e HeLa, foram avaliados quanto à expressão (transcritos e proteínas) de IL-1alfa, IL-1beta, IL-18, seus receptores e antagonistas naturais. O gene codificador de IL-18 foi editado por meio do sistema CRISPR-Cas9, e as linhagens celulares silenciadas foram avaliadas quanto à capacidade de invasão, migração, proliferação, viabilidade e indução da angiogênese. Além disso, 62 biópsias provenientes de pacientes diagnosticadas com câncer cervical avançado foram analisadas por imuno-histoquímica visando à avaliação da expressão de IL-18 nos tecidos tumorais e sua relação com o prognóstico. Resultados: Foi verificado que, embora presente nos queratinócitos normais e transduzidos com os oncogenes do HPV, a expressão de IL-1alfa e IL-1beta encontra-se drasticamente reduzida nas linhagens tumorais de origem cervical, ao contrário de IL-18, que permanece sendo expressa de forma significativa. O silenciamento de IL-18 por CRISPR-Cas9 reduziu a capacidade proliferativa e de formação de colônias das linhagens tumorais cervicais HPV positivas, mas associou-se à tendência de maior capacidade invasiva e de indução da angiogênese. A análise imuno-histoquímica das biópsias mostrou que a expressão de IL-18 na borda dos tumores está associada à resposta completa ao tratamento e menor risco de recorrência linfática (p=0.027 e p=0.034, respectivamente). Embora não se tenha atingido significância estatística, observou-se clara tendência a maiores taxas de sobrevida global e sobrevida livre de doença nos tumores em cuja localização do infiltrado inflamatório era peritumoral (p=0.056 e p=0.165, respectivamente). Da mesma forma, a maior expressão de IL-18 no núcleo e no citoplasma das células tumorais foi associada à tendência de melhor prognóstico. Conclusões: Considerando-se os resultados acima expostos, verificou-se que, embora presentes nos queratinócitos normais e transduzidos com os oncogenes de HPV16, IL-1alfa, IL-1beta, seu antagonista natural e seus receptores são modulados negativamente de forma importante nas linhagens tumorais de origem cervical C33, SiHa e HeLa. Ao contrário, IL-18, seu antagonista natural e seus receptores continuam sendo expressos nas mesmas células. A análise conjunta dos resultados envolvendo as linhagens silenciadas para IL-18 e dos dados obtidos por imunohistoquímica sugere um papel protetor de IL-18, que deve ser confirmado por meio da ampliação da amostra estudada. Deve ser considerada a interação entre as células tumorais e o microambiente, mais especificamente, neste caso, o microambiente imune tumoral, no qual IL-18 constitui um importante mediador. Pretende-se que esta seja a próxima etapa deste estudo