Estudo dos mecanismos de ação da colite ulcerativa experimental nos neurônios entéricos em camundongos deficientes para o gene do receptor P2X7

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Magalhães, Henrique Inhauser Riceti
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Doenças inflamatórias intestinais; Enteric nervous system; Gastroenterologia; Gastroenterology; Inflammatory bowel diseases; Purinergic receptors; Receptores purinérgicos; Sistema nervoso entérico
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10132/tde-19012023-121234/

A literatura demonstra que o sistema nervoso entérico é afetado pelas doenças inflamatórias intestinais (DII), e que o receptor P2X7 pode induzir a morte neuronal. Apesar disso, pouco se sabe sobre os mecanismos de perda de neurônios entéricos ligada às DII. Este trabalho teve como objetivo estudar os mecanismos de ação pelos quais a colite ulcerativa experimental afeta os neurônios mioentéricos do colo distal em camundongos deficientes para o gene do receptor P2X7 (P2X7 KO). Quarenta camundongos C57BL/6 machos wild type (WT) e KO foram submetidos à eutanásia 24 horas (24h) ou quatro dias (4d) após a indução da colite por injeção intra-retal de TNBS (grupos colite). Nos grupos sham apenas o veículo (etanol 35%) foi injetado. Foram utilizados oito grupos (n=5): WT-sham 24h e 4d, WT-colite 24h e 4d, KO-sham 24h e 4d, e KO-colite 24h e 4d. O índice de atividade da doença (IAD) foi observado, e o colo distal coletado para análises de imuno-histoquímica, microscopia eletrônica de transmissão, e histologia. A técnica de imunofluorescência foi realizada para identificação de neurônios imunorreativos à (-ir) calretinina, receptor P2X7, caspase-3 clivada e total, e NF-B fosforilado e total. Foram analisados o número de neurônios por gânglio, a área dos perfis neuronal, nuclear e citoplasmático, e a fluorescência celular total corrigida. A dupla marcação da calretinina com receptor P2X7, caspase-3 e NF-B foi observada nos grupos WT- colite 24h e 4d. O número de neurônios calretinina-ir por gânglio diminuiu nos grupos WT-colite 24h e 4d, e não houve diferença significativa entre os grupos KO. A área do perfil neuronal aumentou nos grupos WT-colite 24h e KO-colite 24h, e a área do perfil nuclear diminuiu no grupo WT-colite 4d. O número de neurônios receptor P2X7-ir por gânglio diminuiu nos grupos WT-colite 24h e 4d. Não foram visualizados neurônios receptor P2X7-ir nos grupos KO. A intensidade da expressão fluorescente do receptor P2X7 aumentou no grupo WT-colite 24h, e da caspase-3 clivada aumentou nos grupos WT-colite 24h e 4d. Não houve diferença na intensidade da expressão fluorescente da caspase-3 total, do NF-B fosforilado e do NF-B total nos grupos WT e KO. Os neurônios mioentéricos demonstraram alterações ultraestruturais compatíveis com necrose nos grupos WT-colite 24h e KO-colite 24h, e compatíveis com apoptose no grupo WT-colite 4d. A análise histológica do colo distal demonstrou que a ausência do receptor P2X7 e a passagem do tempo de 24 horas até quatro dias atenuou a infiltração de células inflamatórias, os danos teciduais, a deposição de fibras colágenas e a perda de células caliciformes, sendo compatível com a melhora sintomatológica e recuperação no IAD. Em conclusão, a colite ulcerativa experimental afetou os neurônios mioentéricos nos grupos WT, e os grupos KO foram menos afetados. Além disso, a morte neuronal parece estar associada à ativação da caspase-3 mediada pelo receptor P2X7, demonstrando que o seu estudo e modulação devem ser considerados em futuras abordagens terapêuticas aplicadas às DII.