Caracterização fenotípica e funcional de células estromais mesenquimais de cordão umbilical pré-condicionadas com agentes farmacológicos

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Rocha, José Lucas Martins
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: 5-azacitidina; 5-azacytidine; Cell therapy; Células estromais mesenquimais; Immunomodulation; Imunomodulação; Mesenchymal stromal cells; Regeneração tecidual; Tacrolimo; Tacrolimus; Terapia celular; Tissue regeneration
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-07022022-180923/

As células estromais mesenquimais multipotentes (MSCs) correspondem a uma população heterogênea de células que podem ser isoladas do estroma de diversos tecidos. Apesar das MSCs possuírem propriedades imunomoduladora e regenerativa, as mesmas são limitadas in vivo devido ao microambiente patológico inóspito. Neste contexto, estratégias de pré-condicionamento de MSCs têm sido propostas para melhorar a sobrevida, viabilidade, enxertia, funções e eficácia terapêutica destas células para aplicação clínica. O objetivo desse estudo foi caracterizar fenotípica e funcionalmente células estromais mesenquimais de cordão umbilical - MSC(CB), précondicionadas in vitro com 5-azacitidina (fármaco modulador epigenético) ou com tacrolimo (fármaco imunossupressor). MSCs foram isoladas de cordões umbilicais e cultivadas para confecção de um banco de células primárias em segunda e terceira passagens. Em seguida, as MSC(CB) foram expandidas, incubadas na presença ou ausência dos fármacos 5-azacitidina (5-AZA) ou tacrolimo (FK506) por períodos prédeterminados e submetidas aos ensaios in vitro para caracterização de identidade e potência: imunofenotipagem, viabilidade e crescimento celular, diferenciação celular em adipócitos e osteócitos, inibição da proliferação de células T, processo autofágico, análises do secretoma das MSC(CB), migração de células endoteliais e de neoangiogênese induzidas pelo secretoma das MSC(CB). Os pré-condicionamentos de MSC(CB) com 5-AZA ou FK506 não alteraram as características básicas desse tipo celular, mantendo a viabilidade celular, o imunofenótipo característico e a capacidade de diferenciação multipotencial. As MSC(CB) pré-condicionadas com 5- AZA apresentaram aumento da secreção de moléculas relacionadas a angiogênese (VEGF, uPA, TIMP-4, artemina, TGF-b1) e inflamação (CCL2, CHI3-L1, VCAM-1, CD105, CD147), além de modularem positivamente vários outros fatores próangiogênicos e inflamatórios. A 5-AZA potencializou as propriedades próangiogênicas das MSC(CB), caracterizada pelo aumento da migração de células endoteliais e da formação de estruturas semelhantes a capilares sanguíneos em ensaios de neoangiogênese, induzidas pelo meio condicionado das MSC(CB) précondicionadas com 5-AZA. As MSC(CB) pré-condicionadas com FK506 apresentaram um aumento de seu efeito imunossupressor demonstrado pelo aumento da inibição da proliferação de linfócitos T. O FK506 aumentou a secreção de moléculas relacionadas a angiogênese (endostatina, PDGF-AA, VEGF, TGF-b1) e a inflamação (CXCL1, CXCL5, trombospondina 1, PGE2) além de modular negativamente outras moléculas (tais como LIF, CD105, FGF19, HGF, MMP9, Serpina E1). Portanto, as abordagens avaliadas neste estudo são promissoras e devem ser testadas em modelos pré-clínicos para avaliação de estabilidade, enxertia, função regenerativas e/ou imunossupressora in vivo e eficácia terapêutica das células pré-condicionadas, visando futuras aplicações clínicas.