Papel da ribonucleoproteína heterogênea nuclear K no reparo de DNA em célula epidermóide oral

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Carvalho, Ana Júlia Rossoni
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Câncer de cabeça e pescoço; DNA repair; Head and neck cancer; hnRNP K; Mitochondria; Mitocôndria; Reparo de DNA
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60140/tde-01092023-141746/

O aumento nos níveis da proteína ribonucleoproteína heterogênea K (hnRNP K) foi descrito em diversos tipos de câncer e associado ao pior prognóstico, incluindo o câncer oral. Esta proteína liga-se ao RNA e DNA e participa de diversas interações regulatórias proteína-proteína, sendo encontrada no núcleo, citoplasma e mitocôndrias. A proteína hnRNP K é alvo de diferentes modificações pós-traducionais como metilação e fosforilação, regulando sua interação com outras proteínas e sua localização subcelular, permitindo que ela participe de diferentes mecanismos de regulação gênica. O objetivo deste trabalho foi estudar a potencial função de hnRNP K no reparo de erro de pareamento de bases por meio de sua relação com a proteína YB1, importante para este sistema de reparo na mitocôndria. As linhagens celulares utilizadas foram de queratinócitos orais não tumorais com superexpressão ou redução da hnRNP K expostas ou não a tratamentos com metotrexato (que causam danos oxidativos no DNA) e U0126 (um inibidor de fosforilação capaz de inibir a fosforilação de hnRNP K e seu consequente transporte para o citoplasma). Por meio de análises de frações proteicas mitocondriais, nucleares e total por Western blot, e por imunofluorescência, evidenciou-se que o acúmulo de hnRNP K no núcleo leva ao aumento dos níveis de p53 e de YB1 na mitocôndria. Ensaios de mobilidade de mudança eletroforética de oligômeros contendo na sequência erro de pareamento de bases e inserções com os extratos proteicos mitocondriais e nucleares mostraram que as células superexpressando hnRNP K reduzem o reparo de erro de pareamento de bases mitocondrial. Por outro lado, ensaios de cometa mostraram que a superexpressão de hnRNP K em células expostas a danos oxidativos por metotrexato possuem um efeito protetor nas células. Desta maneira, a proteína hnRNP K possui um efeito negativo neste sistema de reparo do DNA mitocondrial, porém favorece a resistência à morte celular e regula indiretamente o sistema de reparo de erro de pareamento de bases, podendo também atuar por outros mecanismos, tais como a reprogramação metabólica e redução do estresse oxidativo.