Isolamento de achyrobichalcona e 3-O-metilquercetina a partir de inflorescências de Achyrocline satureioides utilizando cromatografia em contracorrente de alta performance (HPCCC) e avaliação do potencial citotóxico in vitro em linhagem de câncer de mama MDA-MB-231

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Bianchi, Sara Elis
• Orientador(a): Bassani, Valquiria Linck
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Achyirobichalcona; Câncer de mama
• Palavras-chave em Inglês: Achyrocline satureioides; Antitumor; Anticancer; High Performance Countercurrent Chromatography; Isolation; 3-O-methylquercetin; Achyrobichalcone
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/180205

Achyrocline satureioides (Lam.) DC. Asteraceae, conhecida popularmente como marcela, é uma espécie vegetal estudada sob os mais diversos aspectos, químico, tecnológico e farmacológico, sendo muitas de suas propriedades atribuídas aos constituintes fenólicos presentes na planta. As investigações sobre a composição química de extratos hidroetanólicos das inflorescências de Achyrocline satureioides demonstrou a presença dos flavonoides quercetina (QCT), luteolina (LUT) e 3-O-metilquercetina (3OMQ), os quais são metabólitos secundários frequentemente relacionados às atividades biológicas. Além desses flavonoides, a achyrobichalcona (ACB) uma bichalcona de estrutura química e ocorrência inéditas foi recentemente identificada na espécie. O primeiro capítulo da tese se refere ao estudo de revisão utilizando metodologias bibliométricas, sobre as produções científicas e tecnológicas referidas na base de dados do Web of Science do Institute for Scientific Information (ISI), pertencente a Thompson-ReutersTM Company envolvendo chalconas para o tratamento do câncer/tumores. O objetivo do estudo foi mapear as publicações científicas e tecnológicas na última década, de 2006 a 2016. As palavras-chave utilizadas foram: chalcona seguida pelo símbolo (*), câncer e tumor. Independentemente da origem destas chalconas, observou-se oportunidades para o desenvolvimento de produtos visando sua vetorização em alvos biológicos para o tratamento do câncer. seguinte se caracterizou pela obtenção simultânea de frações e substâncias isoladas, bem como a identificação de novos constituintes fenólicos de inflorescências de Achyrocline satureioides. Com o intuito de obter elevadas concentrações destas substâncias com o mínimo de interferentes possível, foram realizadas extrações sucessivas com soxhlet (com os solventes hexano, acetato de etila e metanol), seguido por etapas de isolamento e purificação utilizando técnica de cromatografia em contracorrente de alta performance (HPCCC). Esta segunda parte do trabalho foi realizado em duas etapas: 1) obtenção de duas frações enriquecidas por meio do fracionamento do extrato; e 2) isolamento de ACB e 3OMQ a partir destas frações enriquecidas. A análise da fração 1 (F1) revelou a presença de outros flavonoides-agliconas que foram analisados por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada a detector de espectrometria de massa quadrupolo de alta definição (UPLC-QTOF/HDMS) e de ressonância magnética nuclear (RMN). Os constituintes foram identificados como canferol, isocanferol, 3,3’-di-O-metilquercetina, sendo a presença dos dois últimos relatada pela primeira vez em inflorescências da Achyrocline satureioides. A ACB e 3OMQ foram obtidas com alto grau de pureza e bom rendimento, a partir da F1 e F2, respectivamente, utilizando colunas semi-preparativa e analítica de HPCCC. Como resultado, obteve-se ACB e 3OMQ com alta pureza, respectivamente, 98% e 97% (p/p) e excelente rendimento a partir de extrato seco bruto obtido por sohxlet (69% e 65%, respectivamente), tornando estas substâncias adequadas para uso em estudos de atividade biológica. A etapa seguinte objetivou avaliar comparativamente as propriedades citotóxicas apresentadas pelos isolados, ACB e 3OMQ. Primeiramente, foi avaliado o efeito citotóxico das moléculas isoladas, ACB e 3OMQ, frente a uma linhagem celular de câncer de mama MDA-MB-231 e comparada à linhagem celular epitelial primária não transformada MCF-12A. Os resultados demonstraram que a ACB apresentou efeito citotóxico (GI50 16,68 μM) em relação à linhagem celular MDA-MB-231, com índice de seletividade superior a 2, quando comparado à linhagem MCF-12A. A 3OMQ também apresentou efeito citotóxico (GI50 43,69 μM) sobre o MDA-MB-231; no entanto, o índice de seletividade foi inferior a 2. Subsequentemente, analisou-se a ativação de caspases nas células MDA-MB-231 por citometria de imagem celular e Western Blot. ACB e 3OMQ não ativaram a caspase-8 (mecanismo extrínseco), mas foram capazes de ativar a caspase-3, caspase-7 e caspase-9. Os resultados sugerem que a apoptose na linhagem celular MDA-MB-231 foi induzida por meio de mecanismo intrínseco dependente de caspases. O conjunto de informações obtidas, somadas a maior seletividade demonstram que a ACB é um potente candidato a agente anticâncer.