Disposição cinética e atividade anti-inflamatória in vitro de diterpenos clerodânicos de Casearia sylvestris Swartz e de seus produtos de degradação

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Oda, Fernando Bombarda
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: diterpenos clerodânicos; casearinas; Casearia sylvestris; farmacocinética; metabolização; clerodane diterpenes; casearins; pharmacokinetics; metabolism
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/213766

Os diterpenos clerodânicos do tipo das casearinas são marcadores ativos (ações anti-inflamatória e antiulcerogênica) das folhas da planta medicinal Casearia sylvestris Sw. (guaçatonga). Entretanto, os dados farmacocinéticos para avanço nas pesquisas envolvendo essas substâncias são escassos. Assim, foram realizados ensaios in vitro para compreender a absorção oral e biotransformação desses diterpenos. Os diterpenos caseargrewiina F (casg F) e casearina B (cas B) foram submetidos à degradação gástrica simulada (FGS) e ao metabolismo por microssomas hepáticos de humanos. Os produtos foram identificados por LC-DAD/UV, LC-MS, UPLC-QTOF-MS/MS e RMN. Foram determinadas propriedades físico-químicas e biológicas dos dois diterpenos: log P (LC-UV), estabilidade química, estabilidade em plasma, ligação a proteínas plasmáticas e microssomais e cinética enzimática usando microssomas. Esses dados foram utilizados nos modelos farmacocinéticos baseados na fisiologia (PBPK) para simulação do perfil farmacocinético. Os parâmetros da cinética enzimática velocidade máxima (Vmax), KM (constante de Michaelis-Menten), e clearance intrínseco in vivo (Cl’int) da casg F e cas B foram usados para estimar o clearance hepático (ClH). Para isso, métodos analíticos e bioanalíticos de quantificação (LC-MS) foram desenvolvidos e validados de acordo com as normas da Agência Nacional de Vigilância Sanitária e Agência Europeia de Medicamentos. Os dois diterpenos apresentaram maior instabilidade (p < 0,05) em fluído gástrico simulado (pH 1,2), seguido do tampão TRIS (pH 8,8) e Hank’s (pH 7,4). A casg F e a cas B foram estáveis em plasma (p < 0,05) até 60 e 270 min de incubação, respectivamente. Nos ensaios de metabolismo in vitro o decaimento de ambos diterpenos não foi influenciado pela ausência do sistema regenerador de NADPH. O decaimento foi inibido (p < 0,05) na presença de NaF (200 mM), inibidor de esterases, sugerindo que o metabolismo hepático e das enzimas plasmáticas da casg F e cas B é dependente de esterases. A ligação da casg F a proteínas plasmáticas e microssomais foi de 74,0 e 77,2%, respectivamente, e da cas B foi de 86,7 e 87,4%, respectivamente. Os produtos de degradação ácida majoritários da casg F e cas B foram os seus respectivos dialdeídos, que constituíram mais de 50% dos produtos (normalização das áreas dos picos; LC-DAD/UV). Ambos diterpenos e seus dialdeídos apresentaram log P de 3,6 a 4,0, o que sugere boa permeabilidade celular. Os diterpenos apresentaram perfil cinético de Michaelis-Menten, sendo que a Vmax da casg F foi 2 vezes maior do que a da cas B. O KM da casg F (66,4 ± 6,5 μM) foi próximo ao da cas B (61,4 ± 5,1 μM), indicando que a afinidade aparente das enzimas microssomais humanas por ambos diterpenos é semelhante. A extrapolação in vitro-in vivo resultou em ClH da casg F e cas B (19,6 e 19,2 mL/min/kg, respectivamente), portanto ambos foram considerados compostos de alta razão de extração hepática (98,0 e 96,0 %, respectivamente). Os resultados demonstraram que a casg F é mais suscetível à degradação química do que a cas B, mas ambas possuem similar susceptibilidade à metabolização por microssomas hepáticos de humanos. Assim, pode-se inferir que a biodisponibilidade oral dos dois diterpenos é reduzida em razão da extensa degradação gástrica e da elevada fração metabolizada na passagem pelo fígado. Os modelos de PBPK indicam que os diterpenos apresentam diferente disposição cinética em humanos. Os diterpenos e seus produtos de degradação exerceram baixa inibição (< 50%) da COX-1, COX-2 e sPLA2. A via de ação anti-inflamatória dos diterpenos provavelmente não está envolvida com essas enzimas.