Perfil de expressão de genes associados aos telômeros em carcinoma pulmonar de células não pequenas (NSCLC)

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Storti, Camila Baldin
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC); telômeros; biomarcadores moleculares; genes associados aos telômeros; Non-Small Cell Lung Cancer (NSCLC); telomeres; molecular biomarkers; telomere-associated genes
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/153294

O câncer de pulmão é o câncer que apresenta maior mortalidade no mundo: >1,6 milhões de óbitos por ano segundo a Organização Mundial de Saúde (OMS), sendo o câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) o tipo mais frequente (~ 85%) de carcinoma pulmonar. O NSCLC apresenta dois subtipos histológicos principais: adenocarcinoma (LUAD) e carcinoma de células escamosas (LUSC). Pesquisas têm sido realizadas objetivando identificar biomarcadores moleculares úteis como alvo terapêuticos em NSCLC e os telômeros têm sido considerado alvos promissores para terapias antitumoral, devido ao seu papel crucial na integridade, estabilidade e manutenção genômica. Telômeros humanos consistem em DNA repetitivo rico em G associado a proteínas do complexo shelterin e mantido pela ação da telomerase. Estudos recentes mostraram que a expressão de TERT (subunidade catalítica da telomerase) e de alguns componentes do complexo shelterin estão alterados em câncer de pulmão. No entanto, a correlação entre alterações na função telomérica e o desenvolvimento e progressão de NSCLC não foi elucidada. Portanto, o objetivo do presente estudo foi verificar alterações na expressão de genes associados aos telômeros, incluindo os ncRNAs associados à regulação e manutenção dos telômeros em NSCLC, no intuito de identificar novos biomarcadores associados ao desenvolvimento e progressão do NSCLC. Para tanto, foram realizadas análises de expressão de 50 genes associados aos telômeros em amostras de tecido tumoral e tecido pulmonar normal, adjacente ao tumor, de pacientes com NSCLC, utilizando 1) RT-qPCR para análise de expressão em amostras de 28 pacientes, tratados do Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, 2) Análise de transcritoma utilizando dados de RNA-Seq de amostras de 27 pacientes tratados no Hospital A. C. Camargo e 3) Análise de transcritoma utilizando dados de RNA- Seq, disponíveis no banco de dados The Cancer Genome Atlas (TCGA) e obtidos de amostras de 85 pacientes. Adicionalmente foram analisadas as diferenças entre o perfil de expressão dos genes avaliados em amostras do subtipo LUSC e LUAD. Os resultados revelaram que genes envolvidos com a manutenção dos telômeros estão significativamente, p ≤ 0,05, desregulados nos tumores NSCLC avaliados. Com destaque para os genes TERT, RAD51, DNMT3B, DKC1 e BRCA2 que foram identificados com expressão aumentada nas células tumorais de NSCLC em relação as normais, na maioria das análises. E para os genes SUV39H1, RUVBL1 e DNMT3A que apresentaram aumento de expressão significativo apenas nas amostras do subtipo LUSC. Os ncRNA TERC e TERRA apresentaram expressão elevada nas amostras de NSCLC, destacando a alta expressão de TERC associada ao subtipo LUSC. Somado a estas análises foi calculado o perfil de restrição telomérico (TRF) de amostras tumorais (n=11) e normais adjacentes ao tumor (n=4) de pacientes com NSCLC, e os TRFs de leucócitos de pacientes com NSCLC (n= 14) em comparação com os de doadores saudáveis (n=13). Os telômeros de leucócitos de pacientes com NSCLC estavam menores que os de indivíduos saudáveis (p≤ 0,05) e os telômeros diminuíam conforme a idade do paciente (correlação de Spearman, p= 0,00 e r= -0,644). Porém, não foi encontrada diferença significativa entre os valores de TRF dos tecidos tumorais e normais de pacientes com NSCLC, tal como não foi identificado correlação entre o tamanho de TRF e a idade destes indivíduos, provavelmente devido ao baixo número amostral. Os resultados sugerem que os genes que codificam proteínas e ncRNAs envolvidos com a manutenção dos telômeros podem estar envolvidos na oncogênese de NSCLC e que dentre eles podem haver potenciais biomarcadores para NSCLC, sobretudo do subtipo LUSC, visto a expressão aumentada de alguns genes, SUV39H1, RUVBL1, DNMT3A e TERC, estarem exclusivamente associadas a amostras tumorais deste subtipo.