Determinação de genes/proteínas endossomais em Paracoccidioides brasiliensis e em macrófagos infectados e não infectados

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Voltan, Aline Raquel [UNESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Paracoccidioides brasiliensis; Paracoccidioidomicose; Macrofagos; Fungos - Culturas e meios de cultura; Micologia; Mycology
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/103858

Os fungos dimórficos, Paracoccidioides brasiliensis (espécies cripticas S1, PS2, PS3) e Paracoccidioides lutzii (Pb01-like espécies), são agentes da paracoccidioidomicose (PCM), doença granulomatosa crônica, endêmica na América Latina, principalmente no Brasil. A doença apresenta grande variedade de manifestações clínicas, desde formas localizadas até disseminadas evoluindo para letalidade. O fungo tem capacidade de aderir, invadir e extravasar barreiras impostas pelos tecidos do hospedeiro. P. brasiliensis (Pb18) já foi observado tanto no interior de macrófagos, como no interior de células epiteliais in vivo e in vitro. A identificação do mecanismo pelo qual este fungo sobrevive no interior da célula hospedeira é campo fértil para a descoberta de sua patogênese, já que este microrganismo possui a capacidade de induzir sua própria endocitose em células epiteliais e muito provavelmente em macrófagos. A absorção de micronutrientes pelo fungo apresenta papel singular, tanto para sua nutrição e processo invasivo, como para sua sobrevivência no interior da célula hospedeira. A via endocítica em microrganismos é de fundamental importância na regulação de todo esse processo. O objetivo deste estudo foi avaliar a via endocítica de Pb18 e também de macrófagos infectados com este fungo. A avaliação da via endocítica de Pb18 foi realizada na condição de depleção de metais, onde foram analisados os genes Clatrina e Ypt7 (Homólogo de Rab7) por RT-PCR semi-quantitativo e PCR em tempo real (RT-PCR quantitativo). Também foi analisada a infecção de macrófagos por Pb18 cultivado na depleção de metais e em diferentes tensões de oxigênio. A via endocítica de macrófagos foi analisada por RT-PCR quantitativo e imunofluorescência. Esta análise foi realizada quando o fungo foi cultivado em...