Estudo dos efeitos celulares do inibidor de hipusinação GC7 utilizando coleções de mutantes de Saccharomyces cerevisiae

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Camacho Iglesias, Luis
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual Paulista (Unesp)
• Palavras-chave em Português: Saccharomyces cerevisiae; eIF5A; Desoxi-hipusina sintase; Rastreamento; GC7; Deoxihipusine synthase; Screening
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11449/154244

eIF5A é um fator de tradução envolvido com vários processos celulares, como o controle da proliferação celular e inflamação. Esse fator sofre uma modificação pós- traducional totalmente conservada e específica para sua ativação. Essa modificação é chamada de hipusinação e consiste na modificação de uma lisina específica em duas etapas: primeiro, a porção aminobutil da poliamina espermidina é transferida para o grupamento amino da cadeia lateral da lisina, pela ação da enzima desoxi-hipusina sintase; e, em seguida, o radical transferido sofre uma hidroxilação na posição beta, pela ação da desoxi-hipusina hidroxilase. Assim como eIF5A, desoxi-hipusina sintase é altamente conservada em arquea e eucariotos e é essencial em Saccharomyces cerevisiae. A desoxi-hipusina sintase é inibida por N1-Guanyl-1,7-diaminoheptane (GC7), um análogo estrutural da espermidina. No entanto, estudos mais recentes demonstraram que o composto GC7 apresenta efeitos celulares independentes de eIF5A, o que demonstra que este possui outros alvos. Além disso, não é conhecido como se dá o processo de transporte do GC7 para o meio intracelular ou se existem mecanismos de compartimentalização celular ou externalização do GC7. Por fim, também não são conhecidos mecanismos de metabolização celular do GC7. Desta forma, o presente projeto teve como objetivo a busca de novos alvos celulares para o composto GC7 utilizando rastreamento quimio-genético utilizando a coleção haploide de genes nocautes de S. cerevisiae (genes não essenciais). A partir do rastreamento, foram obtidos resultados de sensibilidade ao GC7 para 96 linhagens nocautes e de resistência para 107. As principais vias afetadas por GC7 estão relacionadas ao transporte e biossíntese de aminoácidos e poliaminas, acidificação vacuolar e ribofagia. Além da identificação destes, foram testados outros nocautes relacionados e foram identificados prováveis transportadores de GC7 para fora do citoplasma. Também foi verificado que GC7 reduz os níveis de putrescina, assim como em cultura de células de mamífero, e outros resultados deste trabalho também estão de acordo com um efeito de GC7 de impacto relevante nesta via de poliaminas. Um dos resultados mais importantes deste trabalho foi a resistência de mutantes de ribofagia a GC7, efeito este que se mostrou independente de eIF5A. Por fim, demonstramos que S. cerevisiae, no background genético da coleção de nocautes, é altamente resistente a GC7 e que os efeitos de GC7 na célula não podem ser revertidos pela adição exógena de espermidina, seu análogo estrutural.