Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2013 |
| Autor(a) principal: |
González, Adriana Sierra
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| Orientador(a): |
Soccol, Vanete Thomaz
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| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Positivo
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia Industrial
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| Departamento: |
Pós-Graduação
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://repositorio.cruzeirodosul.edu.br/handle/123456789/2576
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Resumo: |
O vírus da Febre Aftosa (VFA), que infecta animais biungulados, é altamente contagioso e possui impacto econômico nos países onde a doença é endêmica. O controle epidemiológico da doença é realizado mediante a vacinação e vigilância sanitária, para o qual é necessário o diagnóstico diferencial entre os animais vacinados e os que portam o vírus. Este diagnóstico é realizado por ensaio imuno-enzimático–ELISA/EITB para a detecção dos anticorpos contra a proteína não estrutural 3ABC do VFA. Esta proteína está presente em alto título no soro de animais infectados e deve ser removida durante a produção da vacina, de modo que o animal imunizado não apresente anticorpos detectáveis contra a 3ABC. O objetivo deste estudo foi produzir a proteína 3ABC recombinante, para ser utilizada, em trabalhos posteriores, na obtenção de reagentes para o desenvolvimento de um imuno-ensaio que permita monitorar os processos de purificação da vacina, quanto à remoção da proteína 3ABC e controle de qualidade das partidas produzidas para sua aprovação pelos órgãos regulatórios. O presente trabalho clonou por PCR do gene que codifica para a proteína 3ABC, a partir das cepas A24 Cruzeiro e O1 Campos. O produto amplificado foi clonado nos vetores de expressão pAE e pET-SUMO. Com o intuito de melhorar a estabilidade da proteína recombinante foi realizada a mutagênese do gene 3ABC no sítio ativo da protease 3Cpro para sua inativação. No trabalho também foram avaliados métodos alternativos para a purificação da proteína 3ABCmut. A proteína obtida por diferentes processos de clonagem, expressão e purificação foi imunologicamente testada com anticorpo monoclonal específico e soros hiperimunes. Em todos os casos a proteína foi reconhecida e se mostra com perspectivas para ser usada na obtenção de anticorpos monoclonais e soro hiperimune contra a mesma, para o desenvolvimento dos testes de ELISA e Western Blot visando quantificar as PNEs do vírus da Febre Aftosa (VFA). Todos os experimentos foram realizados na empresa Ourofino Saúde Animal |
