Produção e avaliação sorológica da proteína 3ABC recombinante do vírus da febre aftosa - González, Adriana Sierra (2013)
O vírus da Febre Aftosa (VFA), que infecta animais biungulados, é altamente contagioso e possui impacto econômico nos países onde a doença é endêmica. O controle epidemiológico da doença é realizado mediante a vacinação e vigilância sanitária, para o qual é necessário o diagnóstico diferencial entre os animais vacinados e os que portam o vírus. Este diagnóstico é realizado por ensaio imuno-enzimático–ELISA/EITB para a detecção dos anticorpos contra a proteína não estrutural 3ABC do VFA. Esta proteína está presente em alto título no soro de animais infectados e deve ser removida durante a produção da vacina, de modo que o animal imunizado não apresente anticorpos detectáveis contra a 3ABC. O objetivo deste estudo foi produzir a proteína 3ABC recombinante, para ser utilizada, em trabalhos posteriores, na obtenção de reagentes para o desenvolvimento de um imuno-ensaio que permita monitorar os processos de purificação da vacina, quanto à remoção da proteína 3ABC e controle de qualidade das partidas produzidas para sua aprovação pelos órgãos regulatórios. O presente trabalho clonou por PCR do gene que codifica para a proteína 3ABC, a partir das cepas A24 Cruzeiro e O1 Campos. O produto amplificado foi clonado nos vetores de expressão pAE e pET-SUMO. Com o intuito de melhorar a estabilidade da proteína recombinante foi realizada a mutagênese do gene 3ABC no sítio ativo da protease 3Cpro para sua inativação. No trabalho também foram avaliados métodos alternativos para a purificação da proteína 3ABCmut. A proteína obtida por diferentes processos de clonagem, expressão e purificação foi imunologicamente testada com anticorpo monoclonal específico e soros hiperimunes. Em todos os casos a proteína foi reconhecida e se mostra com perspectivas para ser usada na obtenção de anticorpos monoclonais e soro hiperimune contra a mesma, para o desenvolvimento dos testes de ELISA e Western Blot visando quantificar as PNEs do vírus da Febre Aftosa (VFA). Todos os experimentos foram realizados na empresa Ourofino Saúde Animal