Caracterização molecular de diferentes sorotipos de Actinobacillus pleuropneumoniae obtidos no Sudeste do Brasil

• Ano de defesa: 2011
• Autor(a) principal: Rossi, Ciro César
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; Microbiologia Agrícola
• Palavras-chave em Português: Microbiologia Agrícola; Genética Molecular e de Microorganismos
• Link de acesso: https://locus.ufv.br//handle/123456789/32385

Actinobacillus pleuropneumoniae é o principal micro-organismo responsável pela pleuropneumonia suína. A existência de 15 diferentes sorotipos descritos para esta bactéria, com diferentes graus de virulência, torna de grande importância a sorotipagem, o estudo de fatores de virulência e o acesso à variabilidade genética de isolados clínicos de A. pleuropneumoniae. Este trabalho demonstrou a aplicabilidade de duas técnicas de PCR (PCR multiplex com os genes apx e PCR-REA com o gene apxIVA) previamente desenvolvidas na caracterização dos sorotipos de A. pleuropneumoniae e representou o primeiro estudo de variabilidade genética desta bactéria no Brasil, padronizando técnicas moleculares inéditas no estudo deste micro- organismo. Os resultados mostram que os 91 isolados clínicos de A. pleuropneumoniae utilizados neste trabalho são dos sorotipos 2, 5, 7 e 8. Uma grande variabilidade genética nos isolados foi observada examinados pelas técnicas de ERIC-PCR, BOX-PCR e (GTG)5-PCR, o que pode estar relacionado à presença, em elevado número de cópias, do elemento transponível ISApl1 no genoma dos micro-organismos, uma vez que o genoma desta bactéria é relativamente pequeno (2,2 Mpb). A reação de BOX-PCR, particularmente, proporcionou um maior poder discriminativo, uma vez que um fragmento específico para isolados de A. pleuropneumoniae foi observado e a técnica permitiu a separação dos isolados em um maior número de grupos com base em características em comum, como sorotipo, região e ano de isolamento. Adicionalmente, ferramentas de bioinformática foram utilizadas para caracterizar o gene omlA, que codifica uma proteína da membrana externa de A. pleuropneumoniae e constitui um fator de virulência nesta bactéria. As análises demonstraram a conservação no promotor do gene e a existência de uma região conservada na estrutura da proteína OmlA, provavelmente envolvida na ligação da proteína à membrana da bactéria. O grande polimorfismo presente nas sequências interna e final do gene omlA dos 15 sorotipos permitiu separá-los por reconstrução filogenética e demonstrou a possível diferenciação destes sorotipos em dois eventos evolutivos distintos