Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2007 |
| Autor(a) principal: |
Santos, Valdilene Canazart dos |
| Orientador(a): |
Não Informado pela instituição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Viçosa
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: |
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| Link de acesso: |
http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/6576
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Resumo: |
O peptídeo denominado SBm 7462 (Sintético Boophilus microplus 7462) é uma vacina desenvolvida a partir da seqüência da proteína intestinal do carrapato B. microplus denominada Bm 86 apresentando ação imunogênica contra o mesmo. O carrapato B. microplus é um importante artrópode da medicina veterinária devido a perdas econômicas e problemas de saúde causados pelo referido parasita no gado da América Central e do Sul, bem como da Austrália. Este trabalho descreve a obtenção de linhagens de Kluyveromyces lactis recombinantes produtoras do referido peptídeo. Dois vetores de expressão integrativos foram construídos a partir do vetor pKLAC1: pKLAC1-seq1, contendo a seqüência 1 constituída por três cópias da seqüência de nucleotídeos que codifica para o SBm 7462 e o pKLAC1-seq4, contendo a seqüência 4 constituída por uma única cópia da seqüência de nucleotídeos que codifica o SBm 7462. As construções foram confirmadas por sequenciamento. O cassete de integração obtido pela clivagem do vetor com a enzima SacII foi utilizado na transformação da linhagem selvagem de K. lactis CBS2359. A integração dos cassetes por recombinação homóloga no locus LAC4 foi confirmada por PCR. A análise dos recombinantes de K. lactis por RT-PCR e a detecção do peptídeo, utilizando anticorpos monoclonais contra SBm 7462, comprovaram a transcrição e a expressão extracelular dos peptídeos. Os recombinantes foram cultivados em regime de batelada em YPGlicerol, alcançando uma concentração de biomassa de 10 g·L-1. A biomassa obtida foi transferida para o meio YNB com 4% (p/v) de lactose para induzir o promotor LAC4 e a síntese de SBm 7462 recombinante. Amostras foram analisadas quanto à concentração de proteína extracelular, por eletroforese em SDS-PAGE e detecção do imunógeno. A indução da síntese dos peptídeos foi testada sob duas condições: sem pulso adicional de lactose e com pulso de lactose, a cada 24 horas, durante 144 horas de indução. A concentração de proteínas extracelulares na segunda condição foi maior quando comparada com a condição sem pulso adicional de lactose. Atividade proteolítica não foi detectada no sobrenadante. O perfil eletroforético em SDS-PAGE revelando três bandas de aproximadamente 6, 10 e 21 kDa relacionadas ao peptídeo de interesse é discutido. A detecção do peptídeo vacinal com anticorpos monoclonais comprovou a presença extracelular do rSBm 7462. |
