Trichoderma spp. endofíticos de seringueiras nativas da floresta amazônica: identificação e caracterização de novas espécies e potencial para o controle de fungos fitopatogênicos

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Brito, Vanessa Nascimento
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; Microbiologia Agrícola
• Palavras-chave em Português: Filogenia; Atividade antimicrobiana; Fingerprinting; Microbiologia Agrícola
• Link de acesso: https://locus.ufv.br//handle/123456789/31380

Espécies do gênero Trichoderma estão entre os fungos mais estudados e comercializados como agentes de controle biológico na agricultura. Contudo, estudos envolvendo a análise de Trichoderma spp. endofíticos em plantas nativas da Amazônia brasileira são incipientes. Os fungos endofíticos são definidos como aqueles que vivem no interior de tecidos vegetais, convivendo com seus hospedeiros de maneira simbiótica e apresentam elevada diversidade em florestas tropicais. Os objetivos do presente estudo foram utilizar os marcadores moleculares IRAP (Inter Retrotransposon Amplified Polymorphism) e REMAP (Retrotransposon- Microsatellite Amplified Polymorphism) para a triagem dos isolados de Trichoderma spp., identificar esses isolados endofíticos de plantas de Hevea spp. nativas da floresta amazônica brasileira ao nível de espécie e caracterizar os isolados com potencial para utilização no controle biológico de fungos fitopatogênicos. Trinta e oito isolados de Trichoderma spp. foram analisados empregando os marcadores moleculares IRAP e REMAP. Os perfis de bandas produzidos demonstraram a redundância de alguns isolados obtidos do mesmo tecido e na mesma planta. Essa triagem permitiu a seleção de 30 isolados para a análise filogenética e a identificação. Para identificação ao nível de espécie foram utilizados os oligonucleotídeos específicos para amplificar o espaçador interno transcrito (ITS do rDNA), e dos genes do fator de elongação da tradução 1-alfa (TEF1-α), da subunidade alfa da actina (ACT) e da subunidade maior da RNA polimerase II (RPB2). A maioria dos isolados foram classificados em 11 espécies distintas, sendo quatro novas espécies propostas: Trichoderma sp. VIC 44362, Trichoderma sp. VIC 44361, Trichoderma sp. VIC 44364 e Trichoderma sp. VIC 44363. Estas novas espécies foram sustentadas filogeneticamente com valores de probabilidade à posteriori altamente suportados. A seleção dos isolados de Trichoderma spp. quanto ao seu potencial para o controle biológico de fitopatógenos (Colletotrichum karstii, C. laticiphilum, C. lindemuthianum e Fusarium verticillioides) foi realizada a partir de ensaios de cultura dupla, atividade antifúngica do filtrado liofilizado e do extrato bruto e atividade enzimática. Na análise de cultura dupla, os isolados 432F8C-AM (Trichoderma sp. VIC 44361), 763F25F-AM (Trichoderma sp. VIC 44362), 764F2C-AM (Trichoderma sp. VIC 44362), 762F17F-AC (Trichoderma sp. VIC 44362) e 26F9R-AC (T. ovalisporum) apresentaram os maiores potenciais de inibição dos quatro fungos fitopatogênicos. Para a análise do filtrado liofilizado, os isolados 17F5R-AM (Trichoderma sp. VIC 44363), 24F6C-AM (T. koningiopsis), 245F13C-AC (T. koningiopsis) e 763F25F-AM (Trichoderma sp. VIC 44362) destacaram-se na inibição dos quatro fitopatógenos, bem como, foram capazes de produzir quitinase e β-1,3-glucanase. O isolado 17F5R-AM (Trichoderma sp. VIC 44363) apresentou os melhores resultados em relação à inibição do crescimento micelial e a inibição da germinação dos conídios de todos os fitopatógenos testados, com concentrações mínimas inibitórias relativamente baixas em relação aos demais isolados testados. Os resultados demonstram que os marcadores moleculares IRAP e REMAP são eficientes para serem utilizados durante o processo de triagem para a seleção de isolados de Trichoderma spp. Além disso, a formação do dendograma mostrou uma relação com os resultados da análise filogenética, onde a maior parte dos grupos formados no dendograma representa espécies filogeneticamente próximas. O isolado 17F5R-AM (Trichoderma sp. VIC 44363) tem elevado potencial para ser utilizado no controle biológico dos fitopatógenos. Ressalta-se assim, que o isolamento e identificação de espécies endofíticas do gênero Trichoderma em plantas tropicais nativas podem revelar agentes novos e eficientes para controle de fitopatógenos, além de possibilitar a descoberta de novas espécies.