Transcriptoma dual do efeito leishmanicida de inibidores de enzimas modificadoras de histonas na infecção in vitro e estudos de histonas deacetilases de L. braziliensis

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Agripino, Joice de Melo
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; Bioquímica Aplicada
• Palavras-chave em Português: Transcriptoma; Inibidores enzimáticos; Proteínas; Leishmania braziliensis; Biologia Molecular
• Link de acesso: https://locus.ufv.br//handle/123456789/30444; https://doi.org/10.47328/ufvbbt.2022.685

Leishmaniose cutânea (LC) é a manifestação clínica mais comum entre as leishmanioses, grupo de doenças negligenciadas causadas por parasitos do gênero Leishmania. O Brasil concentra a maior parte dos casos de LC nas Américas, sendo L. (Viannia) braziliensis a espécie mais prevalente. O arsenal terapêutico para o tratamento das leishmanioses é escasso e provoca efeitos colaterais graves, sendo necessário o desenvolvimento de novos medicamentos. As histonas deacetilases (HDACs) e as proteínas arginina metiltransferases (PRMTs) possuem importância para a biologia de diferentes células, incluindo parasitos, pois atuam na epigenética afetando a regulação da expressão gênica e replicação. Por isto vêm sendo apontadas como potenciais alvos farmacológicos. Foram selecionados previamente um inibidor de PRMT (BSF2) e um inibidor de HDAC (TH85) com ação leishmanicida contra L. braziliensis na infecção de macrófagos. Como forma de avaliar potenciais mecanismos de ação, neste trabalho foi realizada a montagem e a análise de RNA-Seq dual de macrófagos infectados por L. braziliensis na infecção e tratados com o BSF2 e TH85. O tratamento com o BSF2 levou à modulação negativa da via do TNF em macrófagos, sendo esta via validada por PCR em tempo real. O tratamento com o TH85 não alterou a expressão diferencial de genes de macrófagos ou do parasito, indicando que este inibidor de HDAC pode realmente estar atuando diretamente no parasito, sem influência direta na transcrição gênica global. Complementando este trabalho, apresenta-se dados preliminares da deleção gênica por CRISPR/Cas9 das 4 HDACs de L. braziliensis. A deleção única ou dupla das HDACs parece ter influenciado no crescimento e divisão celular das populações transfectadas. Porém estes dados precisam ser confirmados com clones isolados. Este trabalho também apresenta o depósito de uma patente sobre a aplicação das HDACs de L. braziliensis recombinantes no diagnóstico de leishmaniose. Como conclusão, este trabalho reforça as HDACs e seus inibidores como potenciais aplicações biotecnológicas no desenvolvimento de medicamentos e de estratégias de diagnóstico de leishmaniose causada por L. braziliensis. Palavras-chave: Transcriptoma. Leishmanicida. L. braziliensis.