Efeitos da deleção genética do receptor B1 de cininas sobre a captação de L-arginina em células endoteliais de camundongos

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Tudela, Renato Cardoso [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Receptor B1 de cininas; Captação de L-arginina; Método de quantificação de L-arginina
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=98578; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48867

Introdução. O Sistema Calicreína-Cininas é um importante fator modulador das funções cardiocirculatórias. Através de seus receptores, as cininas participam de vários processos fisiológicos, como vasodilatação, liberação de autacóides e inflamação. Os receptores B1 (induzível) e B2 (constitutivo) possuem baixa homologia e diferem significativamente quanto às respostas induzidas pelas diferentes cininas, sendo o receptor B2 ativado preferencialmente por bradicinina (BK) e o receptor B1 ativado pelo metabólito des-Arg9-BK. A ativação do receptor B1 no endotélio vascular leva, entre outros efeitos, à geração de óxido nítrico (NO), um radical livre gasoso que rapidamente se difunde para as células musculares lisas induzindo vasodilatação. A produção de NO ocorre através da oxidação de L-arginina (L-arg), um aminoácido catiônico que é internalizado principalmente pelo transportador CAT-1. JUSTIFICATIVA E Objetivos . Estudos recentes conduzidos pelo nosso grupo mostraram que o modelo nocaute para o receptor B1 (B1-/-) apresentava resposta reduzida à acetilcolina em preparações vasculares, além de níveis reduzidos de NO circulante e tecidual (Loiola, et al, 2011). Diante disso, o presente projeto propõe-se a investigar a influência de receptores B1 sobre captação de L-arg e a expressão do CAT-1 em camundongos selvagem e nocaute para o receptor B1. Para isso este foi quantificada a captação de L-arg por cromatografia líquida de alta performance (HPLC), a expressão genética e proteica do transportador CAT-1 por ensaios quantitativos de reação em cadeia da polimerase (qPCR) e wetern-blot, respectivamente. Resultados . Como resultado, foi desenvolvido uma metodologia para se analisar a captação de L-arg em células endoteliais, e verificou-se que o CAT-1 está envolvido neste processo após ensaios com o bloqueador NEM (1mM), e foi observado que células endoteliais de camundongos B1-/- apresentaram uma marcante redução na captação de L-arg, em comparação ao tipo selvagens. Os ensaios de qPCR e western-blot produziram resultados semelhantes, mostrando que os camundongos B1-/- apresentam níveis reduzidos de expressão genética e proteica do CAT-1, o que explica, ao menos em parte, a menor captação de L-arg. Conclusão . A partir destes resultados podemos concluir que a redução dos níveis de NO encontrados em animais nocaute para o receptor B1 se deve, pelo menos em parte, a uma reduzida captação de L-arginina, causada provavelmente por níveis reduzidos da expressão de CAT-1.