Avaliação do potencial antitumoral de peptídeos baseados em sequências hipervariáveis de imunoglobulinas: atividade antitumoral e mecanismo de ação in vitro e in vivo do peptídeo c36 derivado do vl cdr1 (l1), sobre o melanoma murino b16f10-nex2

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Figueiredo, Carlos Rogerio de [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Melanoma; Peptides; Microtúbulo; Apoptose; Ciclo celular peptídeo
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2701410; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47257

O melanoma maligno é um tipo letal de câncer de pele amplamente resistente às terapias convencionais. Recentemente anticorpos monoclonais (mAbs) tem sido utilizados, principalmente os que reconhecem receptores imunoregulatórios. Peptídeos sintéticos, por outro lado, têm sido utilizados principalmente para induzir uma resposta imunospecífica contra o tumor ou para atuar diretamente sobre as células cancerígenas. Peptídeos sintéticos curtos, correspondentes a sequências de regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de diferentes famílias de imunoglobulinas, foram descritos pelo nosso grupo em colaboração com a Universidade de Parma, Italia, demonstrando atividades antimicrobianas, antivirais e antitumorais, independente da especificidade do anticorpo monoclonal (mAb) de origem. Em nosso trabalho, avaliamos a atividade antitumoral in vivo e in vitro de peptídeos sintéticos derivados de CDRs comuns a diferentes imunoglobulinas contra linhagens de células tumorais humanas e murinas, com especial ênfase no modelo de melanoma B16F10-Nex2. O estudo teve como objetivo a descoberta de novas sequências peptídicas com atividades antitumorais promissoras para a terapia do câncer. Quatro peptídeos de CDR de cadeias leves e pesadas (C36-L1, HA9-H2, 1-H2 e MG16-H2) de diferentes anticorpos apresentaram atividade citotóxica contra o melanoma murino e um painel de linhagens de células tumorais humanas in vitro. Além disso, estes peptídeos exerceram importante atividade anti-metastática utilizando-se o modelo singeneico de melanoma murino. Outros peptídeos (D07-H3, MN20v1, MS2-H3) também foram protetores contra melanoma metastático, apesar de não apresentarem citotoxicidade significante contra as células tumorais in vitro. Neste caso, sugerimos que estes peptídeos agem como adjuvantes imunológicos in vivo. Os peptídeos que foram protetores in vivo também induziram a produção de 10 óxido nítrico em macrófagos de medula óssea, mostrando que as células da imunidade inata também podem ser moduladas por peptídeos derivados de CDRs. O peptídeo C36L1 foi escolhido entre as 17 sequências triadas para a avaliação de sua eficácia e mecanismo de ação in vitro e in vivo contra o melanoma. C36L1 é um peptídeo de 17 aminoácidos facilmente absorvido pelas células de melanoma e que atua nos microtúbulos, casuando a sua despolimerização, stress do retículo endoplasmático e apoptose intrínseca. Em concentrações subletais, o peptídeo C36L1 inibiu a migração, invasão e proliferação das células de melanoma com parada na fase G2/M do ciclo celular, regulando a sinalização do eixo PI3K/Akt mediante a regulação de Rho-GTPases e PTEN. A administração peritumoral do peptídeo em modelo de melanoma subcutâneo retarda o crescimento tumoral. Já a administração intraperitoneal induziu uma proteção antitumoral significante e dependente do sistema imune em modelo singeneico de melanoma metastático. Células dendríticas (DCs) estimuladas com C36L1 foram igualmente eficazes na proteção contra o melanoma metastático. Durante o tratamento sistêmico, o peptídeo C36L1 induziu ativação de DCs, além de um aumento no recrutamento de células imunoefetoras no microambiente tumoral metastático, associado à uma significante diminuição da disponibilidade de células T-regulatórias nos órgãos linfóides. Em conclusão, o presente trabalho mostra uma triagem que viabiliza a utilização de imunoglobulinas para o delineamento de sequências conservadas de CDRs dotadas de propriedades antitumorais específicas com potencial para seu desenvolvimento como drogas antitumorais. Entre estas sequências, foi demonstrado que o peptídeo C36 VL CDR1 é um candidato promissor à classe de compostos que interagem com os microtúbulos, podendo desencadear apoptose em 11 células tumorais e indução de uma resposta imune efetora mediante a ativação de DCs, com conseqüente inibição do crescimento do melanoma metastático.