Análise de proteômica do efeito do peptídeo citoprotetor E8 na resposta inflamatória induzida pela IL-1β em condrócitos humanos

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Pazelli, Gabriela Simões [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Osteoartrite; Condrócitos humanos; Peptídeo E8; Proteômica; Vias de sinalização
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/67330

Introdução: A osteoartrite é uma doença crônica degenerativa que afeta as articulações, causando inflamação. Os tratamentos atualmente disponíveis proporcionam um alívio temporário, portanto ainda é necessário desenvolver tratamentos eficientes. O screening em modelo de resposta inflamatória em condrócito humano de peptídeos derivados do Lopap, os quais conservam a atividade citoprotetora da proteína, indicou o peptídeo E8 como um dos mais promissores quanto ao efeito anti-inflamatório, o qual reduz a liberação de citocinas inflamatórias no modelo de estudo. Portanto, o estudo acerca da ação do peptídeo citoprotetor E8 possibilitará o desenvolvimento de novos fármacos mais específicos e eficientes para o tratamento de doenças inflamatórias como a osteoartrite, sendo necessário entender como o peptídeo atua nesses potenciais alvos, bem como seus mecanismos de sinalização. Objetivo: Avaliar o efeito do peptídeo citoprotetor E8 em condrócitos humanos estimulados com a Interleucina-1β através da análise das vias de sinalização por meio do estudo de proteoma. Métodos: A partir da cultura de condrócitos primários humanos, indução da resposta inflamatória pela IL-1b e tratamento com o peptídeo E8, foi realizado o estudo de proteômica baseada em espectrometria de massas utilizando a quantificação relativa Label-free. Seguido da análise por enriquecimento de vias de sinalização, realizado partir das proteínas indicadas como diferencialmente abundantes entre as amostras. Resultados: Foram identificados, na condição sem resposta inflamatória, 1.048 grupos de proteínas nas amostras controle e 1.060 nas amostras tratadas com o peptídeo E8, das quais 27 apresentaram maior abundância nas células tratadas enquanto 47 apresentaram menor abundância. Nas amostras com resposta inflamatória induzida por IL-1β, foram identificadas 1.065 proteínas no controle e 1.190 no tratado com o E8, das quais 21 apresentaram maior abundância nas células tratadas com o E8 enquanto 18 apresentaram menor abundância. Das proteínas indicadas como diferencialmente abundantes, algumas recebem destaque por serem identificadas tanto na análise das amostras com resposta inflamatória induzida quanto nas amostras sem resposta inflamatória, as quais estão relacionadas a diferentes processos inflamatórios ou remodelagem tecidual. O enriquecimento de vias, realizado a partir das proteínas indicadas como diferencialmente abundantes em condrócitos sem resposta inflamatória, apontou 35 diferentes vias de atuação, enquanto o realizado a partir das proteínas indicadas como diferencialmente abundantes nas amostras com resposta inflamatória induzida apontou 31 vias. Em ambas as condições, a maioria das vias são de metabolismo de proteínas e metabolismo de DNA, com destaque para as vias NMD, de processamento de RNA ribossomal e de metabolismo de selenoaminoácido. Conclusões: O peptídeo é capaz de atuar alterando a abundância das proteínas, em especial, proteínas relacionadas a processos inflamatórios e de remodelagem tecidual, como: Proteína ribossômica 40S S23, Serina hidroximetiltransferase, Metaloproteinase de matriz-14, Cadeia alfa 1 do colágeno tipo III, e Heme oxigenase 1. O enriquecimento de vias realizado indica algumas vias interessantes para estudo do mecanismo de ação do peptídeo, a grande maioria envolvida em metabolismo de proteínas e metabolismo de RNA.