Caracterização do anticorpo monocional anti-anti-idiotípico 5.G8 ligante de GD3

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Silva, Tabata de Almeida da [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Melanoma; Imunoterapia; Gangliosídeos
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2544075; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48697

O melanoma é uma doença potencialmente fatal, geralmente derivada da pele, para a qual as terapias convencionais são pouco eficientes. Estudos em nível molecular mostraram que, durante o processo de transformação maligna do melanócito, ocorrem alterações no padrão de expressão de gangliosídeos. O gangliosídeo GD3 está entre os que passam a ser hiperexpressos e tem sido considerado um marcador importante do melanoma humano e um potencial alvo para imunoterapias. Um anticorpo monoclonal (mAb) anti-GD3 é disponível comercialmente, o mAb R24. Apesar de promover regressão de melanoma metastático em pacientes, é um anticorpo tóxico e, por isso, tem aplicação terapêutica limitada. Na tentativa de obter uma alternativa para esse anticorpo, foram produzidos mAbs anti-idiotipo (Id), e anti-anti-Id de R24. O mAb anti-anti-Id 5.G8, in vitro, reconhece linhagens de células de melanoma, promove citotoxidade dependente de anticorpo, fixação de complemento e se liga especificamente a frações enriquecidas de lipídios, extraídas de células de melanoma humano. In vivo, mostrou ser capaz de inibir o crescimento tumoral. O presente trabalho buscou analisar a ligação do mAb 5.G8 à linhagem celular de melanoma humano SKMel-28 e comparar as sequências das porções variáveis das cadeias leves e pesadas, FVL FVH, respectivamente, dos mAbs 5.G8 e R24. Em ensaios de citometria de fluxo, foi possível observar que o mAb 5.G8, além de se ligar a GD3, reconhece molécula de natureza proteica presente em células SKMel-28 e em linhagem de melanócitos murinos 83 transformados para expressar GD3, ST8D4. Por western blotting, utilizando extrato de células SKMel-28, foi verificado que o mAb 5.G8 se liga à molécula de peso molecular entre 12 e 17 kDa. A análise das sequências nucleotídicas e peptídicas das regiões variáveis dos mAbs R24 e 5.G8 mostrou 100% de homologia entre FvLs e, nas FvHs, foram identificados quatro nucleotídeos diferentes, resultando em dois aminoácidos diferentes. Um deles, o aminoácido polar neutro, glutamina, encontrado no mAb R24, foi substituído por um aminoácido polar básico, lisina, no mAb 5.G8 e está localizado na framework1 (FR1), posição 2, que faz parte da zona de Vernier. Este achado pode explicar as diferentes propriedades dos dois anticorpos.