Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2016 |
| Autor(a) principal: |
Marques, Viviane Figueira
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| Orientador(a): |
Souza, Miliane Moreira Soares de
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| Banca de defesa: |
Santos, Huarrisson Azevedo,
Senna, José Procópio Moreno,
Merval, Marcia Giambiagi de,
Pereira, Ingrid Annes |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
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| Departamento: |
Instituto de Veterinária
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Palavras-chave em Inglês: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9725
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Resumo: |
Staphylococcus spp. tem papel importante na etiologia da mastite bovina. Staphylococcus aureus é considerada a espécie mais relevante devido à produção de fatores de virulência, tais como “slime”, o que favorece a formação do biofilme. O presente trabalho teve por objetivo detectar a expressão fenotípica da formação de biofilme em 20 isolados de S. aureus oriundos de mastite bovina, detectar e quantificar a expressão dos genes envolvidos na sua produção e regulação, além de detectar a resistência fenogenotípica aos beta-lactâmicos para avaliação da possível relação da produção de biofilme com a resistência antimicrobiana. Os isolados foram caracterizados através de testes fenogenotípicos e MALDI-TOF, submetidos às provas fenotípicas de detecção da formação de biofilme e avaliação da suscetibilidade aos beta-lactâmicos. A Concentração Inibitória Mínima (CIM), Concentração Bactericida Mínima (CBM) e a Concentração Inibitória Mínima no Biofilme (CIMB) foram determinadas para três isolados selecionados com base na variação da intensidade da produção de biofilme. Posteriormente, todos os isolados foram submetidos à técnica de PCR para detecção dos genes de produção de “slime” (icaA e icaD), proteína Bap (bap), beta-lactamase (blaZ) e proteína ligante de penicilina alterada (mecA). Além de detecção do sistema regulador Agr (agr RNAIII) e da tipificação do sistema Agr (agr I, agr II, agr III e agr IV). Foi realizada Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) para determinar o intervalo de tempo mais adequado para a análise do biofilme. A PCR em tempo real (qPCR) foi realizada nos tempos selecionados para quantificar a expressão dos genes icaA, icaD e hld em três isolados com produção variada de biofilme. Todos os isolados foram produtores de biofilme e a maioria apresentou os genes icaA e icaD. Apenas um isolado apresentou o gene bap. O gene agr tipo II mostrou prevalência de 70%. A MEV mostrou mudanças graduais no arranjo bacteriano durante a formação de biofilme ao longo das fases da curva de crescimento que atingiu seu pico de formação na fase estacionária. A análise transcricional evidenciou maior expressão dos genes ica no tempo de 8 h de crescimento e hld em 24 h. Contudo, a cepa N-365 mostrou baixa produção dos genes ica. Para este estudo, a resistência à penicilina foi relacionada com a produção de beta-lactamase, enquanto a elevada CBM detectada para cefoxitina pode estar associada à proteção que o biofilme oferece, episódio evidenciado pelo fato dos isolados apresentarem valores de CIMB superiores aos CIMs testados para as células planctônicas. |
