Caracterização da atividade antiparasitária do dietilditiocarbamato frente a diferentes cepas de Trypanosoma cruzi

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Oliveira, Johny Wysllas de Freitas
• Orientador(a): Silva, Marcelo de Sousa da
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Programa de Pós-Graduação: PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICA
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; DETC; Atividade antiparasitária; DTU’s
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
• Link de acesso: https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/27810

A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, acomete milhares de pessoas anualmente. Os fármacos tradicionalmente utilizados além de serem altamente citotóxicos não são eficazes na fase crônica da doença. Além disso, o parasita apresenta diversidade genética que pode ocasionar diferentes manifestações clínicas e resistência aos tratamentos. O dietilditiocarbamato de sódio pertencente a classe dos ditiocarbamatos, compostos químicos de alta versatilidade farmacológica que podem interagir com metais e induzir a produção das espécies reativas de oxigênio e nitrogênio. O objetivo deste trabalho é caracterizar a ação inibitória do DETC frente diferentes cepas de T. cruzi. Primeiramente, as diferentes cepas Dm28c (TcI), Y (TcII), QMM9 (TcIII) e Cl Brener (TCVI) foram cultivadas em meio LIT. Os ensaios antiparasitários avaliaram diferentes concentrações do DETC em períodos de 24h e 48h, através dos métodos de contagem e da resazurina, contra as formas epimastigota e tripomastigota de T. cruzi. A citotoxicidade celular foi analisada frente as linhagens animais 3T3 (fibroblasto) e RAW (macrófago) das 24 horas após aplicação do composto e avaliada por meio do ensaio de redução do MTT. Adicionalmente, foi analisado os mecanismos de morte parasitária desencadeados pelo composto frente a epimastigota de T. cruzi no período de 24 horas. Foi observado também a atividade mitocondrial das diferentes cepas de T. cruzi na forma epimastigota após 24 horas de tratamento com o composto por meio do ensaio de potencial de membrana. Além disso, as alterações morfológicas causadas pelo composto após 24 horas de tratamento através da microscopia eletrônica de varredura. Ademais, analisou-se a ação inibitória do DETC sob proteínas proteolíticas dos extratos do T. cruzi por zimográfia seguido de densitometria. Considerando que os ditiocarbamatos apresentam importante ação inibitória sob a α-anidrase carbônica de T. cruzi buscou-se evidenciar o ancoramento do DETC nesta proteína através do ensaio in silico de docking molecular. A partir dos ensaios antiparasitários determinou-se a concentração do DETC necessária para reduzir o crescimento populacional em 50% (IC50) de cada uma das cepas em 24 horas, resultando de 28,8 µM até 66,4 µM para forma epimastigota e de 23,5 µM até 79,0 µM para forma tripomastigota a depender da cepa. Por meio da citotoxicidade celular observou-se perfil inibitório do composto que demonstrou citotoxicidade moderada contra as linhagens animais 3T3 e RAW, determinando assim os IC50 de 81,46 µM para 3T3 e 96,34 µM para RAW. A inexistência ou baixíssima atividados dos marcadores anexina e do PI (fosfato inorgânico), tornaram inviável determinar os mecanismos de morte celular desencadeados pelo composto frente ao parasita. Mediante a avaliação do potencial da membrana mitocondrial observou-se danos mitocondriais causados pelo DETC nas diferentes cepas do parasita inibindo o potencial de atividade da membrana interna da mitocôndria, chegando a atingir 80%. Por intermedio das análises da microscopia eletrônica de varredura observou-se que o composto desencadeia ações na estrutura celular parasitária, resultando na descontinuidade na membrana, rompimento e formação de poros. Por meio da zimografia foi constatado uma redução na atividade proteolítica dos extratos dos parasitas alcançando 36%. Observou-se que o DETC apresentou alta capacidade de interação para inibir a α- Anidrase carbônica, analisando o posicionamento do ancoramento na estrutura proteica. Portanto, o DETC apresenta-se como possível candidato para tratamento alternativo a doença de Chagas devido a elevada atividade antiparasitária, citotoxicidade moderada e apresenta ações sobre compartimentos específicos do parasita.