Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2016 |
| Autor(a) principal: |
Castro, Clarissa Caetano de |
| Orientador(a): |
Hübner, Silvia de Oliveira |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Pelotas
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Veterinária
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| Departamento: |
Faculdade de Veterinária
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
http://repositorio.ufpel.edu.br/handle/prefix/3493
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Resumo: |
A busca de novas substâncias com atividade antiviral levou este estudo a investigar a ação do peptídeo antimicrobiano P34, produzido pelo Bacillus sp. P34, frente ao herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) e de moléculas sintetizadas da 2-picolilamina e 2-aminoetilpiperidina derivadas da classe da 4-tiazolidinona denominadas V19 (2a), V20 (2b), V23 (2c), V28 (2d), V29 (2e), AK11 (1a), AK16 (1d), AK17 (1e), AK18 (1b) e AK20 (1c) frente a diversos vírus que infectam animais. Inicialmente foram determinadas as concentrações não citotóxicas dos diferentes compostos, em diferentes linhagens celulares, através dos métodos MTT e vermelho neutro. A seguir a atividade antiviral foi avaliada mediante um ensaio de inibição do efeito citopático. Em todos os testes, o título viral em cultivo celular foi comparado ao título viral na presença de cada composto para a determinação do percentual de inibição (PI). O P34 demonstrou um PI de 99,94% e alto índice de seletividade (SI de 22,9). Os testes para identificar o modo de ação indicaram que o peptídeo P34 não atua sobre as células MDBK, ou receptores celulares. Em concentrações citotóxicas o P34 obteve efeito virucida e 100% de inibição viral nos ensaios de redução viral e de penetração. Foi evidenciada total inibição na produção das partículas de BoHV-1 quando as células foram tratadas com o P34 posterior a 8 h de infecção. Houve redução significativa (p< 0.01) do título do BoHV-1 na presença do P34 após 8 h de infecção (PI de 90%), chegando a 99,9% de PI após 18 h de tratamento pós-infecção. O P34 inibiu o BoHV-1 tanto no meio extracelular, inibindo a infecção celular, quanto no meio intracelular, após a infecção, impedindo o egresso. Com relação às moléculas derivadas da 4-tiazolidinona a menos tóxica foi a AK 16 (157 μg/mL) nas quatro linhagens de células (RK13, MDCK, CRFK e MDBK) e as mais tóxicas foram as AK11, AK18 e AK20 (19 μg/mL). O PI da molécula AK16 foi de 96,9%, 90,1% e 90,1% contra o EAV, FCV e CPV-2, respectivamente. O composto AK17 mostrou PI de 90,1% contra o EAV, a V20 de 78% contra BVDV, a V28 de 94,4% contra EIV e 78% contra BVDV e a V29 de 94,4% contra CPV-2. As moléculas V20 e V28 foram escolhidas para dar continuidade ao estudo frente ao BVDV. Foram determinados para V20 um SI de 16,8 e de 14,73 para V28. Nos ensaios de inibição da produção de partículas virais, adsorção, competição com receptores celulares, penetração viral e efeito virucida não foram observadas diferenças significativas entre os títulos do BVDV com e sem tratamentos com as moléculas. A associação das moléculas V20 e V28 aumentou de 78 para 82% o PI, não sendo verificada alteração no PI quando as moléculas foram associadas com os antivirais interferon-α 2b ou ribavirina. Através da determinação da curva de crescimento do BVDV foi evidenciada atuação no período entre 1 a 5 h pós-infecção com o BVDV, sugerindo ação posterior à entrada viral, mas antes do egresso, provavelmente no período de síntese do RNA e enzimas virais. Os resultados demonstram que o peptídeo P34 e os compostos V20 e V28 derivados da 4-tiazolidinona podem ser considerados promissores antivirais contra BoHV-1 e BVDV. |
