Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2024 |
| Autor(a) principal: |
Neis, Alessandra |
| Orientador(a): |
Pinto, Luciano da Silva |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Pelotas
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/handle/prefix/15077
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Resumo: |
Células tumorais apresentam glicanos modificados em sua superfície, que não estão presentes em células saudáveis, decorrentes das mutações que afetam o metabolismo celular. As lectinas, proteínas que interagem com carboidratos de forma altamente específica e seletiva, reconhecem os glicanos modificados e induzem a morte celular. Frequentemente, os N-glicanos (como a high mannose) e O-glicanos (como os antígenos T e Tn) modificados estão presentes em diversos tipos de cânceres. Neste estudo, análises de bioinformática e tecnologia do DNA recombinante foram empregados para construir, caracterizar e testar uma lectina quimérica com atividade antitumoral. Esta quimera é constituída de um mutante da lectina de banana (Musa acuminata) e a lectina do cogumelo Xerocomus chrysenteron (XCL) e apresenta afinidade tanto por high mannose quanto pelos antígenos T e Tn. Estudos de docking contribuíram para a análise da afinidade de interação com os ligantes descritos, sendo que a quimera apresentou maior afinidade pelo antígeno T e a high mannose com cinco ramificações. A dinâmica molecular por 100 ns permitiu avaliar a estabilidade da macromolécula, que demonstrou pouca variação nas métricas de RMSD, RMSF e raio de giro na temperatura testada, mantendo também a conformação esperada. Testou-se a produção recombinante da quimera em diferentes cepas, temperaturas e concentrações de agente indutor. A nova proteína de 32 kDa foi produzida em E. coli na cepa Origami e suas porções isoladas foram produzidas na cepa RIL. O protocolo de indução da expressão a 16 °C overnight produziu a maior quantidade da lectina quimérica, sendo solúvel em D-PBS após a diálise. Sua atividade antitumoral foi testada em cultivo celular 2D e 3D em células de câncer de pâncreas CFPAC-1 e demonstrou acentuado efeito antiproliferativo no cultivo 2D, embora sua ação seja reduzida no cultivo 3D. As prováveis vias de ação da lectina quimérica foram avaliadas utilizando marcadores conhecidos de apoptose e autofagia por Western Blotting, revelando que a quimera estimula a morte celular através de um mecanismo distinto daquele apresentado por suas porções isoladas. Este estudo é pioneiro na área de lectinologia e apresenta uma possível terapia antitumoral de amplo espectro derivada de fontes naturais e produzida em grandes quantidades através de expressão recombinante. |
