Isolamento, avaliação e identificação de micro-organismos endofíticos de folhas de Bauhinia monandra e suas interações com a lectina de folhas (BmoLL)

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: MELO, Rosilma de Oliveira Araujo
• Orientador(a): COELHO, Luana Cassandra Breitenbach Barroso
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pernambuco
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pos Graduacao em Ciencias Biologicas
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Micro-organismos; Staphylococcus aureus; Fungos
• Link de acesso: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/24262

Não existem estudos no que se refere à identificação de micro-organimos endofíticos de Bauhinia monandra, embora sejam relatados diversos estudos farmacológicos realizados com essa espécie. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi à prospecção de micro-organismos endofíticos de folhas de B. monandra, no intuito de identificar estes endofíticos, bem como explorar o potencial biotecnológico das actinobactérias endofíticas para produção enzimática e antimicrobiana. Folhas de B. monandra coletadas no Campus da Cidade Universitária (Recife, PE) foram desinfectadas, maceradas e semeadas em meios de cultura específicos. Após a purificação, as colônias bacterianas e fúngicas foram submetidas à identificação morfológica macroscópica e microscópica. As actinobactérias endofíticas foram avaliadas quanto à produção de enzimas; bem como foi realizada a avaliação antimicrobiana para seleção da estirpe com elevado potencial antimicrobiano e posterior produção de metabólitos ativos em cultivo submerso, seguido de processos de extração e separação cromatográfica dos compostos antimicrobianos obtidos do melhor meio de cultura. No presente estudo, as estirpes de fungos filamentosos endofíticos (59,7%) pertenciam aos gêneros Penicillium, Curvullaria e Aspergillus. As bactérias não-filamentosas endofíticas (26,9%) foram agrupadas nos gêneros Bacillus, Burkholderia, Enterobacter. E cepas de actinobactérias endofíticas (13,4%) foram classificadas como Streptomyces e Nocardiopsis. A metodologia utilizada para verificar quantitativamente a capacidade de produção enzimática foi eficiente, demonstrando que todas as actinobactérias endofíticas (n=9) das folhas de B. monandra foram capazes de hidrolisar amido, pectina, Tween 20 e 80; e celulose, confirmando a presença de amilase, pectinase, lípase, esterase e celulase, respectivamente. Na avaliação da produção de caseinase todas as actinobactérias endofíticas foram positivas, no entanto, para a degradação da gelatina apenas Nocardiopsis spp. 2F foi negativo, bem como no ensaio de tirosina todas as estirpes foram positivas exceto Streptomyces spp. 1F. A avaliação da atividade antimicrobiana primária das actinobactérias endofíticas de folhas de B. monadra, realizada pelo teste de bloco de gelose mostrou que as cepas endofíticas Nocardiopsis spp. 2F, Streptomyces spp. 3F, Streptomyces spp. 5F, Streptomyces spp. 6F e Streptomyces spp. 8F, possuíam atividade antimicrobiana apenas diante de bactérias Gram-positivas, principalmente cepas de Staphylococcus aureus (n=16) isolados clínicos multiressistentes e oxacilina resitente (ORSA). A estirpe endofítica Streptomyces spp. 5F destacou-se como melhor produtor de substâncias antimicrobianas em 11 dos 12 meios de cultura submersa perante cinco cepas de S. aureus isolados clinicos, selecionando o meio ISP-3 com melhor desempenho produtivo. O processo extrativo dos produtos ativos com solventes foi bem sucedido com a massa micelial, destacando-se o metanol. Segundo separação cromatográfica de alta eficiência dos extratos brutos: aquoso do líquido metabólico (EAL) e metánolico da massa (EMM), o fracionamento demonstrou que os dois extratos apresentavam compostos com natureza polar. Estes resultados demonstram que a prospecção de micro-organismos endofíticos constitui uma fonte valiosa na obtenção de novas espécies e novos metabólitos bioativos, bem como a descoberta de moléculas com atividade enzimática e antimicrobiana promissora diante de bactérias multirresitentes do gênero Staphylococcus.