Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2002 |
| Autor(a) principal: |
Johannes Haver, Nicolaas |
| Orientador(a): |
Cassandra Breitenbach Barroso Coelho, Luana |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Pernambuco
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: |
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| Link de acesso: |
https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/1743
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Resumo: |
A lectina de folhas de Bauhinia monandra (BmoLL) foi previamente purificada por fracionamento com sulfato de amônio (F 0-60%) seguido por cromatografia de afinidade com gel de Guar. Para o estudo da BmoLL foi desenvolvido um anticorpo policlonal em coelho contra esta lectina; anti-BmoLL IgG foi purificada em coluna de Sepharose-Proteína A. Em imunodifusão, anti-BmoLL IgG apresentou reações cruzadas com lectinas de Bauhinia purpurea e Ulex europaeus I. Lectinas de Bandeiraea simplicilofia II e Triticum vulgaris reagiram inespecificamente com substâncias presentes no antissoro mas ausentes na preparação obtida de IgG. Precipitações de anti-BmoLL IgG com extratos de outros tecidos de B. monandra, revelaram outras formas moleculares da lectina. Anti-BmoLL IgG foi conjugada com peroxidase e aplicada em ELISA, confirmando os resultados de imunodifusão. Para a sua aplicação no biossensor piezoelétrico, o rendimento do método de imobilização foi testado imobilizando anti-BmoLL IgG em placas de ouro (4 x 4 x 0.5 mm3) em quantidades de 0, 110 e 220 mg em 100 ml utilizando dextrana tratado com bromocianeto. As concentrações de IgG não imobilizada foram medidas pela quantificação de proteína após a imobilização e lavagens com PBS. As quantidades de 110 e 220 mg de anti-BmoLL IgG apresentaram respectivamente, rendimentos de imobilização de 46% e 33%. Anti-BmoLL IgG (110 mg/ml) foi imobilizada na superfície de ouro de Microbalança de Cristal de Quartzo (do inglês Quartz Crystal Microbalance, QCM). Na execução de ensaio de piezoelétrico, a QCM foi incubada com solução de BmoLL (91 mg/ml) seguido de uma redução de freqüência com 5 kHz, mostrando um grande reconhecimento da lectina pela IgG imobilizada. No potenciometro e no medidor de turbidez, anti-BmoLL IgG não provocou nenhuma alteração na ligação de galactose por BmoLL, indicando que a IgG purificada não tem afinidade pelos sítios de ligação de carboidrato de BmoLL |
