Comparação de métodos de extração e purificação de DNA de material de arquivo, para utilização em análise de amostras forenses no Instituto de Pesquisa e Perícias em Genética Forense

• Ano de defesa: 2014
• Autor(a) principal: Netto, Mônica Sertã Corrêa
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes; BR; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Saúde, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense
• Palavras-chave em Português: Paraffin embedded tissues; DNA extraction protocols; Forensic genetics; Forensic pathology; Human identification; Tecidos em blocos de parafina; Protocolos de extração de DNA; Genética forense; Patologia forense; Identificação humana; Genética legal; DNA; Identificação; Antropologia forense; CNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINA::ANATOMIA PATOLOGICA E PATOLOGIA CLINICA
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/15024

A identificação fundamentada na análise do DNA é apontada como a maior revolução cientifica na esfera forense desde o reconhecimento das impressões digitais, por ter grande poder discriminatório na individualização de pessoas. As técnicas empregadas em identificação por DNA ostentam duas vantagens sobre os métodos convencionais de identificação: a estabilidade química do DNA, mesmo após longo período de tempo, e a sua ocorrência em todas as células nucleadas do organismo humano, o que permite condenar ou absolver um suspeito com uma única gota de sangue ou através de um único fio de cabelo encontrado em cena de crime. Evidências forenses, proveniente de material de arquivo como tecidos emblocados em parafina e que ficam acautelados nos Serviços de Patologia e Genética Forense são, em muitos casos, o único registro disponível da amostra biológica coletada. No entanto, no contexto forense, onde esse tipo de material é proveniente de amostras antigas e de restos mortais, ainda existem poucos protocolos adequados para a recuperação de DNA para identificação forense. O objetivo desse estudo é avaliar métodos de extração e purificação de DNA a partir de material de arquivos biológicos, a fim de determinar um protocolo que ofereça boa recuperação de DNA e se adeque à realidade laboratorial forense do IPPGF e de outros serviços forenses. Vinte e duas amostras de tecido de cadáveres, incluídas em blocos de parafina, foram submetidos a dois métodos de pré-tratamento; desparafinização com xileno e por calor em microondas, e posteriormente, utilizado quatro metodologias para extração de DNA que incluem: Método Orgânico, Chelex 100®, Purificação em Membranas (NucleoSpin) e o Método de Purificação em Resina (DNA IQ). Observamos que os resultados espectrofométricos não são bons parâmetros nos quais devam-se apoiar para direcionar os procedimentos técnicos de extração nos casos de material de arquivo emblocado em parafina, pois, mesmo quando as medidas espectrofotométricas revelavam a presença de DNA, não havia amplificação bem sucedida do fragmento esperado. A Reação em Cadeia da Polimerase demonstrou-se uma técnica eficiência, ao amplificar um DNA degradado e em baixa quantidade. As melhores concentrações de DNA, por PCR TR, foram obtidas nas metodologias orgânica (fenol-clorofórmio-álcool isoamílico) e o Nucleospin, sendo posteriormente pareadas para comparação, utilizando o teste não paramétrico de Friedman, que mostraram diferença significativas (p<0,05) entre os métodos de Chelex e Orgânico e de Nucleospin e Orgânico. As metodologias que apresentaram as maiores médias de concentração de DNA ao longo de 1983 a 2011 e também por tipo de tecido emblocado em parafina foram o Orgânico e o Nucleospin. As metodologias que apresentaram maiores médias do número de loci amplificados foram o Orgânico e Nucleospin DNA, seguida do DNA IQ e Chelex. Esses resultados reforçam e validam a manutenção do protocolo Procedimento Operacional Padrão (POP) baseado na metodologia orgânica (fenol-clorofórmio-álcool isoamílico, utilizado no IPPGF