Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2021 |
| Autor(a) principal: |
Miranda, Robson Rodrigo
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| Orientador(a): |
Iulek, Jorge
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| Banca de defesa: |
Guimarães, Beatriz Gomes,
Bittencourt, Juliana Vitoria Messias,
Etto, Rafael Mazer,
Pereira, Romaiana Picada |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Estadual de Ponta Grossa
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa Associado de Pós-Graduação em Química - Doutorado
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| Departamento: |
Departamento de Química
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
http://tede2.uepg.br/jspui/handle/prefix/3454
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Resumo: |
O estudo da estrutura tridimensional (3D) de proteínas nos ajuda a entender as relações entre sequência de aminoácidos, estrutura e função, o que é essencial para melhor compreensão dos mecanismos de patogenicidade dos organismos e para o desenvolvimento de novos fármacos. Neste contexto, o presente trabalho visa determinar as estruturas tridimensionais das enzimas Histidina Amônio Liase e Imidazolona Propionase de Trypanosoma cruzi (TcHAL, TcIP) e a Gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase de Candida albicans (CaGAPDH). Com a estrutura refinada da TcHAL, observou-se a ausência do chamado domínio de proteção do sítio ativo, diferentemente de estruturas 3D previamente conhecidas, como de Fenilalanina Amônio Liases de plantas e fungos, portanto, ela é a primeira estrutura resolvida de uma amônio-liase eucariótica que não possui este domínio. A enzima TcIP foi até expressa em E. coli (DE3) usando-se o vetor pET-28a(+), porém, os testes de purificação por cromatografia de afinidade com diferentes íons metálicos imobilizados não foram suficientes para obtê-la numa pureza adequada para os ensaios de cristalização; então, sua estrutura foi hipotetizada por modelagem por homologia. A enzima CaGAPDH foi expressa em E. coli (DE3) utilizando-se o vetor pET-28a(+) e purificada por cromatografia de afinidade a Ni+2. Cristais da CaGAPDH apareceram em 3 dias após a montagem das gotas e o melhor difratou a uma resolução máxima de 2,98 Å. A indexação e o processamento mostraram que o cristal pertence ao grupo de espaço P21 e apresenta simetria não cristalográfica translacional. Estudo posterior ao refinamento da estrutura mostrou que a CaGAPDH apresenta duas mutações conjugadas, Glu296 no lugar de uma comum Ala e Ala258 no lugar de comuns Lys ou Asn, resíduos frente a frente, que possivelmente levam à conservação de propriedades estruturais. Desta forma, os resultados apresentados servem de suporte para investigações posteriores que esclareçam a participação das enzimas HAL e IP no metabolismo do T. cruzi, assim como da GAPDH em C. albicans. Ademais, as informações estruturais ora apresentadas poderão contribuir para o desenvolvimento de novos quimioterápicos para doença de Chagas e também para a candidíase, ante posterior comprovação da CaGAPDH como alvo molecular. |
