Identificação por espectrometria de massas de proteínas séricas fracionadas em matrizes de lectinas-Sepharose

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Salis, Célio Ribeiro de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso embargado
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Biomarcadores; Biotecnologia; Lectinas; Tuberculose
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=106764

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O fracionamento de amostras complexas se configura como uma etapa essencial na&nbsp;</span></font><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">análise proteômica, principalmente quando se trata da pesquisa de biomarcadores&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">séricos, uma vez que proteínas presentes em grande abundância podem dificultar a&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">detecção de outras menos abundantes. Em estudos utilizando amostras de sangue&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">humano, os protocolos de pré-tratamento das amostras são de vital importância,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">principalmente no que diz respeito à remoção de proteínas abundantes como&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">albumina e imunoglobulinas. O uso de cromatografia de afinidade, contendo&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">matrizes de lectinas imobilizadas tem sido investigado para análise de glicoproteínas&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">séricas, abrindo uma nova área de emprego biotecnológico das lectinas vegetais. No&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">presente estudo, buscou-se avaliar o desempenho de duas matrizes cromatográficas&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">de lectinas imobilizadas em CNBr-Sepharose 4B® no fracionamento de&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">(glico)proteínas séricas, identificá-las por espectrometria de massas e a comparar os&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">subproteomas séricos de indivíduos sadios e doentes, a fim de sugerir um ou mais&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">candidatos a biomarcadores de tuberculose pulmonar (TB-p). Os objetos das&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">matrizes cromatográficas foram obtidos por metodologias conhecidas e&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">estabelecidas, onde as lectinas das sementes de Artocarpus incisa (frutalina) e de&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">Dioclea altíssima (DAL) foram isoladas e purificadas, por cromatografias de&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">afinidade, a partir de seus extratos salinos. A seguir as lectinas foram imobilizadas&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">em Sepharose 4B® ativada com Brometo de Cianogênio, conforme instruções do&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">fabricante. Alíquotas de 1,0 mL, do soro de indivíduos não portadores e portadores&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">de TB-p, foram submetidas às cromatografias de afinidade em matrizes de frutalina-&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">Sepharose e DAL-Sepharose e os conteúdos protéicos das frações resultantes&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">foram identificados por espectrometria de massas. Os resultados mostraram que as&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">matrizes frutalina-Sepharose e DAL-Sepharose foram capazes de fracionar o soro&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">humano em uma fração não retida, rica em albumina, além de dezenas de outras&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">(glico)proteínas menos abundantes e em outra fração (retida), predominantemente&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">constituída por imunoglobulinas. A análise comparativa entre o soro de indivíduos&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">não portadores e portadores de TB-p, sugere que as isoformas 2 e 3 da alfa-1-&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">antitripsina, a proteína relacionada com a haptoglobina, bem como uma de suas&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">isoformas e a isoforma 2 da proteína ligadora de vitamina D&nbsp; podem ser consideradas&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">potenciais candidatas a biomarcadores de tuberculose pulmonar.&nbsp;</span></div><div style=""><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">Palavras chaves: Lectina. Biomarcadores. Glicoproteínas. Tuberculose. Frutalina.&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">Dioclea altíssima. Artocarpus incisa.&nbsp;</span></div>