Identificação por espectrometria de massas de proteínas séricas fracionadas em matrizes de lectinas-Sepharose - Salis, Célio Ribeiro de (2013)
O fracionamento de amostras complexas se configura como uma etapa essencial na análise proteômica, principalmente quando se trata da pesquisa de biomarcadores séricos, uma vez que proteínas presentes em grande abundância podem dificultar a detecção de outras menos abundantes. Em estudos utilizando amostras de sangue humano, os protocolos de pré-tratamento das amostras são de vital importância, principalmente no que diz respeito à remoção de proteínas abundantes como albumina e imunoglobulinas. O uso de cromatografia de afinidade, contendo matrizes de lectinas imobilizadas tem sido investigado para análise de glicoproteínas séricas, abrindo uma nova área de emprego biotecnológico das lectinas vegetais. No presente estudo, buscou-se avaliar o desempenho de duas matrizes cromatográficas de lectinas imobilizadas em CNBr-Sepharose 4B® no fracionamento de (glico)proteínas séricas, identificá-las por espectrometria de massas e a comparar os subproteomas séricos de indivíduos sadios e doentes, a fim de sugerir um ou mais candidatos a biomarcadores de tuberculose pulmonar (TB-p). Os objetos das matrizes cromatográficas foram obtidos por metodologias conhecidas e estabelecidas, onde as lectinas das sementes de Artocarpus incisa (frutalina) e de Dioclea altíssima (DAL) foram isoladas e purificadas, por cromatografias de afinidade, a partir de seus extratos salinos. A seguir as lectinas foram imobilizadas em Sepharose 4B® ativada com Brometo de Cianogênio, conforme instruções do fabricante. Alíquotas de 1,0 mL, do soro de indivíduos não portadores e portadores de TB-p, foram submetidas às cromatografias de afinidade em matrizes de frutalina- Sepharose e DAL-Sepharose e os conteúdos protéicos das frações resultantes foram identificados por espectrometria de massas. Os resultados mostraram que as matrizes frutalina-Sepharose e DAL-Sepharose foram capazes de fracionar o soro humano em uma fração não retida, rica em albumina, além de dezenas de outras (glico)proteínas menos abundantes e em outra fração (retida), predominantemente constituída por imunoglobulinas. A análise comparativa entre o soro de indivíduos não portadores e portadores de TB-p, sugere que as isoformas 2 e 3 da alfa-1- antitripsina, a proteína relacionada com a haptoglobina, bem como uma de suas isoformas e a isoforma 2 da proteína ligadora de vitamina D  podem ser consideradas potenciais candidatas a biomarcadores de tuberculose pulmonar.  Palavras chaves: Lectina. Biomarcadores. Glicoproteínas. Tuberculose. Frutalina. Dioclea altíssima. Artocarpus incisa.