| Resumo: |
A vitrificação de folículos secundários isolados pode ser uma opção eficiente para a preservação da fertilidade de mulheres tratadas e curadas de certos tipos de câncer que oferecem o risco de reintrodução de células malignas após o transplante de tecido ovariano. O objetivo dessa dissertação foi avaliar a morfologia, viabilidade e desenvolvimento folicular (crescimento e formação de antro), bem como investigar as proteínas relacionadas com a função esteroidogênica (aromatase) e com o remodelamento da membrana basal [metaloproteinases 2 (MMP-2) e 9 (MMP-9)] em folículos secundários após vitrificação e cultivo in vitro (CIV). Para isso, o córtex ovariano foi fragmentado e folículos secundários foram mecanicamente isolados. Imediatamente após o isolamento, parte dos folículos frescos foram fixados em paraformaldeído a 4% e destinados à imunomarcação para a aromatase e às MMPs-2 e 9. Os demais folículos foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: folículos secundários frescos (FSF) e folículos secundários vitrificados (VSF), ambos seguido do CIV por 6 ou 12 dias. Ao final do D6 e D12 de cultivo os FSF e VSF foram submetidos às análises de morfologia, viabilidade (azul de trypan), formação de antro, diâmetro folicular e oocitário. Além disso, a aromatase e as metaloproteinases também foram investigadas nos dois grupos de folículos (FSF e VSF). Nossos resultados mostraram que a vitrificação reduziu significativamente o percentual de folículos intactos após CIV, comparado aos FSF. O diâmetro folicular e oocitário dos VSF foi inferior (P < 0,05) ao dos FSF em ambos os dias de CIV. Os VSF apresentaram redução da viabilidade entre os dias 6 e 12 de cultivo, no entanto não foram observadas diferenças significativas em comparação aos FSF em ambos os dias. A formação de antro nos VSF foi inferior (P < 0,05) à dos FSF, no entanto, foi observado um aumento desse percentual de 6 para 12 dias em ambos os grupos de folículos. Além disso, os resultados mostraram que nos dias 6 e 12 a imunomarcação para a aromatase nas células da granulosa (GC) dos FSF foi forte e moderada, respectivamente, enquanto que nos VSF foi, respectivamente, moderada e forte. Quanto às MMPs, foi observada marcação moderada para as MMP-2 e MMP-9 nas GC dos FSF e VSF em ambos os dias de cultivo, exceto nos FSF no D6, que apresentaram marcação forte para MMP-9. Em conclusão, folículos secundários vitrificados são capazes de crescer e se desenvolver durante 12 dias de cultivo in vitro. Os folículos também mostraram evidências da sua capacidade esteroidogênica e de remodelamento da membrana basal, as quais são importantes para o desenvolvimento folicular. |
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