| Resumo: |
O maior obstáculo no desenvolvimento de técnicas reprodutivas na espécie canina consiste na diferença na fisiologia reprodutiva da cadela comparada a de outras fêmeas de mamíferos domésticos. O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da adição de FSH em diferentes concentrações e períodos no cultivo in vitro de folículos pré-antrais isolados caninos. Folículos pré-antrais secundários foram isolados e destinados ao cultivo em meio αMEM suplementado em que foram comparados os seguintes tratamentos: CONTROLE (somente meio de base); FSH100 (concentração fixa de 100 ng/ml de FSHrec durante todo de cultivo) e FSH SEQUENCIAL (FSHSeq adição de FSHrec de forma sequencial (100, 500 e 1000 ng/ml) nos dias 0, 6 e 12 do cultivo) o cultivo celular foi realizado a 39ºC e 5% de CO2 em ar, com troca de meio realizada a cada dois dias. Os parâmetros avaliados foram viabilidade, formação de antro, diâmetro e taxa de crescimento folicular. Para verificar a viabilidade folicular, foram utilizados os marcadores fluorescentes Calceína-AM (4 µM ) e Etídio-Homodímero-1 (2 µM) para vivos e mortos, respectivamente. Os dados obtidos foram submetidos à ANOVA seguida dos testes t de Student e Kruskal-Wallis para os parâmetros de diâmetro folicular e taxa de crescimento, respectivamente. Os dados foram expressos em média ± erro padrão da média (MD± SEM). Para os parâmetros viabilidade e formação de antro utilizou-se o qui-quadrado (P<0,05). Todos os folículos submetidos à fluorescência (100%, P<0.05) apresentaram-se corados em verde pela calceína-AM ao fim do cultivo (D18; P<0.05). No tratamento FSHSeq, o diâmetro folicular foi significativamente superior a partir do D12 (398,07±12,06) quando comparado ao grupo controle (343,11±8,61) (P<0,05). Enquanto que no D18, no FSHSeq (439,80±14,08) apresentou-se significativamente superior aos demais tratamentos (P<0,05). Com relação às taxas de crescimento folicular diária (µm/dia), estas foram significativamente superiores no tratamento FSHSeq (6,47±0,55) quando comparada ao controle (3,67±0,32) e FSH100 (4,47±0,38). Para a formação de antro, os tratamentos FSH100 e FSHSeq apresentaram-se significativamente superiores quando comparados ao grupo CONTROLE no D12 de cultivo. Quando comparado os dias de tratamento, no D112 o FSHSeq apresentou taxa de extrusão significativamente superior quando comparado ao CONTROLE (P<0.05). Diante destes resultados, pode-se concluir que a adição de FSH de forma sequencial ao meio de cultivo mantém a sobrevivência de folículos pré-antrais isolados caninos. Palavras-chave: Canino, folículo pré-antral, cultivo, FSH |
|---|
